磷脂酶D(PLD)測(cè)試盒_脂肪酸代謝系列_分光法
測(cè)定方法：分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
注 意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
磷脂酶D（EC3.1.4.4）即磷脂酰水解酶，是催化磷酸二酯鍵水解和堿基交換反應(yīng)的一類酶的總稱，廣泛存在于高等動(dòng)植物和細(xì)菌等多種生物體中，具有參與細(xì)胞脂質(zhì)代謝、信號(hào)傳導(dǎo)、生物膜形成的抗逆境脅等生理功能。
磷脂酶D(PLD)測(cè)試盒_脂肪酸代謝系列_分光法
測(cè)定原理：
磷脂酶D催化水解磷脂酰末端的磷脂酰二酯鍵生成磷脂酸，氧化酶催化作用下生成甜菜堿和過(guò)氧化氫，過(guò)氧化氫在過(guò)氧化氫酶的作用下將4-氨基和重蒸酚氧化成粉紅色物質(zhì)，在500nm處有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、研缽、超速冷凍離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋，無(wú)水乙醇。
試劑組成和配制：
提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體55mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體8mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加3mL無(wú)水乙醇充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑四：液體35mL×1瓶，4℃避光保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體1mL×1支，4℃避光保存。
酶液提?。?/p>
1.組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心5min，取全部上清于4℃、100000g離心30min，棄上清，取沉淀溶于1mL試劑一。
2.細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后于4℃，10000g離心5min，取全部上清于4℃、100000g離心30min，棄上清，取沉淀溶于1mL試劑一。
3.血清：直接測(cè)定。
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