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上海酶聯(lián)生物研究所

ELISA試劑盒怎么做好優(yōu)化

時間:2017-2-15閱讀:187
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ELISA試劑盒質(zhì)量確保是一個雜亂的進(jìn)程,很多重要的環(huán)節(jié)都會影響檢查質(zhì)量。每一職業(yè)商品都有好有壞,由于生產(chǎn)廠家繁復(fù),讓消費(fèi)者在選擇這一塊有了很大的困惑。

ELISA試劑盒加樣的優(yōu)化:
在這一進(jìn)程中,通常狀況下有三次加樣,它們分別是加標(biāo)本,加酶物,加底物。凍住血清融解后,蛋白質(zhì)部分濃縮,散布不均,應(yīng)充沛混勻宜輕緩,防止氣泡,可上下倒置混和,不要在混勻器上激烈振蕩。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑,而血清標(biāo)本只要待血清天然凝結(jié)、縮短后即可獲得。也可在板孔中參加稀釋液,再在其參加血清標(biāo)本,然后在微型震動器上震動1分鐘以確?;旌?。通常說來,在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃,超過一星期測定的需低溫冰存。

ELISA試劑盒包被條件的優(yōu)化:
1.包被液的選擇:通常常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液,假如包被的抗原在堿性條件下不穩(wěn)定的話,也可以運(yùn)用pH7.2的磷酸鹽緩沖液。
2.包被濃度的選擇:包被的zui適濃度隨固相載體和包被物的性質(zhì)變化,通常蛋白質(zhì)的包被濃度為1-5ug/ml,要明確對于特定包被抗原的zui適包被濃度需求經(jīng)過試驗(yàn)來斷定。
3.包被溫度的選擇:通常是4-8度條件下放置一個黑夜或許37度保溫2小時,我們激烈建議4-8度條件下包被,有利于蛋白活性的堅(jiān)持。
4.包被抗原的選擇:可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類。小分子抗原比方多肽以及一些小分子有機(jī)化合物,由于分子量太小,通常難于直接吸附在酶標(biāo)板上,通常都先使其與無關(guān)蛋白質(zhì),比方BSA等偶聯(lián),偶聯(lián)物吸附于固相載體上。

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