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上海酶聯(lián)生物研究所

ELISA試劑盒的理論與實(shí)踐

時(shí)間:2017-8-15閱讀:93
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在正式打開實(shí)驗(yàn)之前,首先要了解的是理論知識(shí)。而理論與實(shí)踐都是不行短少的,今天為您說說ELISA試劑盒理論與實(shí)踐的。

已包被抗原或抗體的固相載體在低溫而且枯燥的條件下,一般能夠保存6個(gè)月,而有些不完整的試盒,僅供給包被用抗原或抗體,檢測人員需自行包被。

在ELISA測定進(jìn)程中作為吸附劑和容器,不參加化學(xué)反響??勺鱁LISA中載體的資料許多,zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能,抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保留本來的免疫學(xué)活性,加之它的價(jià)格低廉,所以被遍及選用。聚苯乙烯為塑料,可制成各種形式。

在ELISA中一般有兩次抗原抗體反響,即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后??乖贵w反響的完成需求有必定的溫度和時(shí)刻,這一保溫進(jìn)程稱為溫育,有人稱之為孵育,在ELISA中似不恰當(dāng)。

在ELISA夾心法中,參加板孔中的標(biāo)本,其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結(jié)合的時(shí)機(jī),只要zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體觸摸。這是一個(gè)逐步平衡的進(jìn)程,因而需經(jīng)分散才能到達(dá)反響的結(jié)尾。在這以后參加的酶符號(hào)抗體與固相抗原的結(jié)合也相同如此。這就是為什么ELISA反響總是需求必定時(shí)刻的溫育。

從ELISA試劑盒理論來說,溫育選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃(冰箱溫度)等。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度,也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。在樹立ELISA辦法作反響動(dòng)力學(xué)研討時(shí),實(shí)驗(yàn)標(biāo)明,兩次抗原抗體反響一般在37℃經(jīng)1-2小時(shí),產(chǎn)品的生成可達(dá)。

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