ELISA試驗(yàn)的原理好像很簡(jiǎn)單，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗刷和關(guān)閉?？墒?，即使是平鋪直敘的洗刷和關(guān)閉，如果做得不太好，也有可能毀了整個(gè)試驗(yàn)。在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，我們是否能取得有意義的信息，ELISA試劑盒這在很大程度上取決于成果的信噪比。ELISA試劑盒布景噪音會(huì)影響您對(duì)成果的判斷。怎么下降ELISA的布景，上海酶聯(lián)生物研究所教你辦法。

一、洗刷很重要

1. 洗刷過(guò)程看似很無(wú)聊，其實(shí)很重要，由于如果未結(jié)合的材料（如非特異結(jié)合的抗體或檢測(cè)試劑）殘留在微孔板中，那么它會(huì)添加布景噪音。如有必要，可添加洗刷液中的鹽濃度，這會(huì)阻撓非特異結(jié)合反響。如果布景過(guò)高，而您置疑洗刷不行時(shí)，能夠測(cè)驗(yàn)添加洗刷次數(shù)。

關(guān)閉更重要

2. 關(guān)閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)。這就下降了可發(fā)作信號(hào)的抗體非特異結(jié)合的時(shí)機(jī)。您當(dāng)然也期望抗體只與意圖蛋白結(jié)合吧。如果您的布景過(guò)高，置疑關(guān)閉不充分，那么您能夠測(cè)驗(yàn)運(yùn)用更高濃度的關(guān)閉液，或恰當(dāng)延長(zhǎng)關(guān)閉時(shí)刻。

如果您一直被布景問(wèn)題所困擾，那么或許您該花些時(shí)刻來(lái)優(yōu)化關(guān)閉液。這可能需求時(shí)刻，但也是值得的?，F(xiàn)在主要有兩種類型的關(guān)閉液：蛋白和非離子型去污劑。您運(yùn)用的類型須取決于多個(gè)要素，包含微孔板的外表試劑、ELISA試劑盒吸附的抗原、您的抗體和檢測(cè)試劑。好的關(guān)閉液應(yīng)下降非特異性結(jié)合，但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測(cè)試劑發(fā)作相互作用。

3. ELISA試驗(yàn)zui常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種關(guān)閉液廉價(jià)、安穩(wěn)，在去除洗刷過(guò)程中的一些非特異結(jié)合上很有用。但它們只在存在時(shí)起作用，ELISA試劑盒由于很簡(jiǎn)單被洗掉。因而一切洗刷液中也有必要添加關(guān)閉液。請(qǐng)勿運(yùn)用高濃度（正常濃度為0.01-0.1%），它會(huì)下降特異結(jié)合，發(fā)作假陰性。另一個(gè)挑選是運(yùn)用蛋白和非離子型去污劑這兩種關(guān)閉液，后者可協(xié)助洗刷過(guò)程中的關(guān)閉。

4. 蛋白關(guān)閉液則有所不同，是*的。它們與敞開(kāi)位點(diǎn)結(jié)兼并關(guān)閉，一起安穩(wěn)與微孔板結(jié)合的抗原分子。常用的蛋白關(guān)閉液包含牛血清白蛋白（BSA）、脫脂奶粉、正常血清和魚(yú)明膠。血清組分的內(nèi)在多樣性可使它有用阻攔許多不同類型的分子相互作用。不過(guò)，它的缺點(diǎn)在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。處理這個(gè)問(wèn)題的一種辦法是運(yùn)用雞或魚(yú)的正常血清。

二、抗體濃度須優(yōu)化

ELISA試驗(yàn)我們通常會(huì)follow師兄師姐留下來(lái)的操作過(guò)程，ELISA試劑盒可是如果試劑稍有不同，則可能需求優(yōu)化抗體的量。記住，非特異的抗體結(jié)合會(huì)添加布景。為了避免這一點(diǎn)，切勿運(yùn)用過(guò)多的一抗或二抗。

三、檢測(cè)試劑要適量

另一點(diǎn)也很清楚明了：切勿運(yùn)用過(guò)多的檢測(cè)試劑。如果濃度過(guò)高，或者未正確稀釋，則會(huì)導(dǎo)致高布景。也不要顯色過(guò)度，如有必要，優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)參加停止液。

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