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上海酶聯(lián)生物研究所

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中國倉鼠 卵巢細胞(CHO-S)

參  考  價:面議
具體成交價以合同協(xié)議為準

產(chǎn)品型號

品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所在地上海市

更新時間:2017-08-01 21:25:46瀏覽次數(shù):306次

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中國倉鼠 卵巢細胞(CHO-S)在科研中深受科研工作者的喜歡,而市面上各種試劑產(chǎn)品,不計其數(shù),采購優(yōu)良試劑請跟我來,這里全心專注科研,助您創(chuàng)新科技,盡享成功,我們希望為您奉上滿意的產(chǎn)品,期待您的來電來咨詢!

中國倉鼠 卵巢細胞(CHO-S)
細胞介紹
貼壁生長及懸浮生長均可(用于蛋白表達時,應使用懸浮生長狀態(tài),此時細胞生長狀態(tài)更好,比表面積更高,生物反應器中的傳質(zhì)、傳熱效率更高,同時也可提高生物反應器空間使用效率。工業(yè)上大規(guī)模生產(chǎn)單抗,重組蛋,大部分使用懸浮培養(yǎng)法來生產(chǎn))
細胞特性
1  來源:中國倉鼠
2  形態(tài) :成纖維細胞樣
3  含量:>1x10 6 個/mL
4  污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5  規(guī)格:T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝運輸和保存 :可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式:(1)干冰運輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復蘇;(2)存活細胞,收到后應繼續(xù)生長,傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。


中國倉鼠 卵巢細胞(CHO-S) 
細胞用途:僅供科研使用。
細胞培養(yǎng)步驟
一. 培養(yǎng)基 及 培養(yǎng) 凍存 條件準備:
1)培養(yǎng)基信息:EX-CELL CD-CHO CHO Serum-free Medium,ChemicallyDefined(Sigma-Aldrich,貨號:24361C)添加物:L- *(Sigma-Aldrich,貨號:G8540-25G)Anti-Clumping Agent(Gibco,貨號:01-0057AE)備注 :CD-CHO CHO Serum-free Medium 請按照培養(yǎng)基配制說明書配制,L-*配制濃度為 200mM,工作濃度為 8mM(即稀釋 25 倍,如 500ml CHO Serum-freMedium 中添加 20ml 200mM L-*,抗結團劑使用為 1%,即 500ml CHOSerum-free Medium 中添加 5ml 抗結團劑)
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37 攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為 70%-80%。
3)凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞 處理 :
傳代、轉(zhuǎn)染、建庫及實驗室規(guī)模小試方法:賽百慷(上海)生物技術股份有限公司提供的 CHO-S 細胞為已馴化的細胞,具有良好的適應懸浮生長及適應無血清培養(yǎng)基生長特性。
傳代 方法:
1.10cm 皿中培養(yǎng):使用計數(shù)器(計數(shù)器或者血球計數(shù)板計數(shù))計數(shù),接種密度為 3×10 5 個細胞/ml 接種于提前 37℃預熱的新鮮培養(yǎng)基中(建議培養(yǎng)基取 7-8ml,此時細胞生長狀態(tài)較好),置于搖床上生長,轉(zhuǎn)速為 120-130rpm,濕度為 70-80%,5%二氧化碳,溫度為 37℃。
2.培養(yǎng)約 2-3 天,細胞密度達到 1×10 6 個活細胞/ml 時,應 1000rpm,25℃離心5min,離心后計數(shù)(此時應稀釋),然后接種密度為 3×10 5 個細胞/ml 接種于提前 37℃預熱的新鮮培養(yǎng)基中。細胞數(shù)目足夠時,可凍存。也可選擇 125ml 或者 250ml 搖瓶中培養(yǎng)細胞。(注意細胞培養(yǎng)液體積一般在總體積的五分之一,如在 125ml 搖瓶中加入 25ml 培養(yǎng)物,應注意在搖瓶中培養(yǎng)細胞時應將瓶蓋稍微擰松,以便于氣體交換,同時也不宜擰得過松,防止細胞污染)轉(zhuǎn)染

中國倉鼠 卵巢細胞(CHO-S)
方法:在連續(xù) 5 代細胞密度未超過 2×10 6 個活細胞/ml 時,可以使用 FreeStyle Max 轉(zhuǎn)染試劑(Gibco,貨號:16447)在 CD CHO Serum-free Medium 中直接轉(zhuǎn)染。(注意:Anti-Clumping Agent 會干擾 FreeStyle Max 轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率,同時也會干擾其他脂質(zhì)體型轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效率)
建庫方法 :若需要建庫,可將細胞接種于 125ml 搖瓶中(接種密度為 3×10 5 個細胞/ml,總體積為 25ml),此方法同樣適用于穩(wěn)定表達所需要蛋白的細胞株的建庫工作。建庫時,需要先建初級庫(master bank)(一般為 10 支,每支細胞總數(shù)不少于 4.5×10 7 個細胞),此步驟結束后,從凍存的初級庫中取出一支復蘇,按照同樣步驟建次級庫(working bank)(相同的,一般為 10 支,每支細胞總數(shù)不少于 4.5×10 7個細胞)。實驗室 規(guī)模小試方法:將挑選出的穩(wěn)定細胞株從 96 孔板到 24 孔板到 6 孔板到 10cm 皿中逐級擴大培養(yǎng)后(此時需要注意在培養(yǎng)過程中應及時保種,以防止后續(xù)步驟出現(xiàn)污染,及應對可能的表達量衰退現(xiàn)象)以 3×10 5 個細胞/ml 接種于 125ml 搖瓶中,轉(zhuǎn)速為120-130rpm,溫度為 37℃,濕度為 70-80%,連續(xù)培養(yǎng)一周,每天取樣做出相應的細胞生長曲線,細胞活率曲線,蛋白表達曲線,可根據(jù)實際情況,每天取樣測出培養(yǎng)基中葡萄糖含量,以便決定是否要補加葡萄糖,同時可使用 CHO Feedioreactor Supplement 作為細胞發(fā)酵中補料,同時做出相應的細胞生長曲線,細胞活率曲線,蛋白表達曲線,為中試放大補料添加做出合理數(shù)據(jù)支持。
注意事項:
1. 收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

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