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上海酶聯(lián)生物研究所

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倉鼠卵巢細胞亞株(CHO-K1)

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所在地上海市

更新時間:2017-07-26 11:38:16瀏覽次數(shù):178次

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倉鼠卵巢細胞亞株(CHO-K1)
細胞介紹
該細胞株是源自成年中國倉鼠卵巢深入活體組織切片的 CHO 細胞的亞克隆。
細胞特性
1  來源:倉鼠卵巢
2  形態(tài) :上皮細胞樣
3  含量:>1x10 6 個/mL
4  污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5  規(guī)格:T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝運輸和保存:使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的 2ml 凍存管發(fā)送存活細胞。收到細胞后,可在 1000RPM,常溫條件下,離心 5min 后,于潔凈操作臺棄去上清,加入*使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm 培養(yǎng)皿或者 T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。


倉鼠卵巢細胞亞株(CHO-K1)
細胞用途:僅供科研使用。
細胞培養(yǎng)步驟
一. 培養(yǎng)基 及 培養(yǎng) 凍存 條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備 F-12K 培養(yǎng)基(F-12K :GIBCO,貨號:21127-022),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37 攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為 70%-80%。
3)凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞 處理 :
1) 復(fù)蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入 4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。


倉鼠卵巢細胞亞株(CHO-K1)
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 2ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 到 1:5 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量*,細胞變圓脫落后,加入約 1ml 含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加 10%DMSO 后進行凍存。
注意事項:
1. 收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

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