非標記抗體酶法

酶橋法

    *首先用酶免疫動物，制備效價高、特異性強的抗酶抗體；

    *以二抗作橋，將抗酶抗體聯(lián)結(jié)在一抗上；

    *再將酶結(jié)合在抗酶抗體上，經(jīng)顯色顯示抗原的分布

    -優(yōu)點：任何抗體均未被酶標記。酶是通過免疫學原理與酶抗體結(jié)合的。避免了共價連接對抗體和酶活性的損害，提高了方法的敏感性，而且節(jié)省一抗的用量。但抗酶抗體不易純化。

幾點說明

    *一抗(假設(shè)來自種屬A)的稀釋度可大些，使抗體的兩個Fab段均與組織抗原結(jié)合。

    *二抗——橋抗體(抗種屬A的IgG抗體)應(yīng)過量，使其Fab段一個與一抗結(jié)合，另一個則游離。

    *因抗酶抗體與一抗均系種屬A IgG，具有相同的抗原性，所以橋抗體游離的Fab能與抗酶抗體結(jié)合，起橋作用，將其連接在與組織抗原結(jié)合的一抗上。

PAP法

    * 與酶橋法相似，不同的是，PAP 法將酶橋法的第 3、4 步并為1步，用PAP復(fù)合物代替。

    *PAP是離體制備的復(fù)合物( HRP--抗 HRP)。

    *顯色與酶橋法相同，PAP復(fù)合物中的過氧化物酶催化底物水解，形成不溶性終產(chǎn)物。

PAP法評價

    *PAP法比直接法、間接法、酶橋法更敏感。特別適用于石蠟切片中微量抗原和抗原性減弱抗原的檢測。

    -缺點：步驟較多，時間較長，不適用于臨床常規(guī)檢查。

    *由于常做石蠟切片，故可用于回顧性研究。

(二) 親和組織化學法

    *是以一種物質(zhì)對某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)。

    *這種方法敏感性更高，有利于微量抗原(抗體)在細胞或亞細胞水平的定位。