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南京信帆生物技術有限公司
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南京信帆生物:檢測宿主細胞殘留DNA,ddPCR好處多

時間:2016/5/4閱讀:1320
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在制造治療性的蛋白、疫苗及其他生物制品時,制藥公司必須從細菌或哺乳動物宿主細胞中純化出活性的分子。然而,由于這個過程的效率不高,宿主細胞的雜質(包括DNA)經(jīng)常會污染產(chǎn)品。因此,制造商必須確保宿主細胞殘留DNA(HCD)的水平低于WHO的標準,通常是100 pg/劑量以下。

這就需要嚴格的質量控制。通常,分析人員采用實時定量PCR(qPCR)來測定殘留DNA的水平,這需要純化出宿主細胞殘留DNA,以去除樣品中的PCR抑制劑。這一步不僅增加時間和成本,也會造成DNA的損失,導致污染水平被低估。

為此,Bio-Rad公司推出了新產(chǎn)品 – ddPCR™ Supermix for Residual DNA Quantification。這種預混液可配合Bio-Rad的微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)使用,直接測定生物制品中的宿主細胞殘留DNA。

與實時定量PCR技術相比,使用微滴式數(shù)字PCR(ddPCR)技術和預混液的好處在于可跳過DNA純化的步驟,直接測定宿主細胞殘留DNA。Why?因為微滴式數(shù)字PCR技術采用反應分液和終點分析,不容易受到PCR抑制的影響。

同時,ddPCR技術對靶分子的數(shù)量進行直接計數(shù),而不需要建立標準曲線,因此大大簡化了殘留DNA的定量。據(jù)Bio-Rad介紹,每一批的ddPCR Supermix都是在嚴格的質量控制下生物試劑的,確保不含可檢測的大腸桿菌、小鼠、人、酵母和CHO細胞DNA。

ddPCR™ Supermix for Residual DNA Quantification是以2x濃度提供的,包含探針法ddPCR所需的各種組分,不含引物、探針和模板。它采用熱啟動聚合酶,確保酶在分液的過程中失活。

Bio-Rad的QX200微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)在兩年前推出。與傳統(tǒng)的定量PCR相比,數(shù)字PCR的度和靈敏度更佳。利用微滴式數(shù)字PCR技術,研究人員可以檢測稀有突變,測定拷貝數(shù)變異,并對基因表達進行定量。

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