帶您體驗(yàn)人硫氧還蛋白還原酶（TrxR）ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)

硫氧還蛋白還原酶是一種NADPH依賴的包含F(xiàn)AD結(jié)構(gòu)域的二聚體硒酶，屬于吡啶核苷酸-二硫化物氧化還原酶家族成員。硫氧還蛋白還原酶 thioredoxin reductase和硫氧還蛋白、NADPH共同構(gòu)成了硫氧還蛋白系統(tǒng).TrxR有很多生物學(xué)功能,與人類某些疾病的發(fā)病機(jī)制也密切相關(guān)。

由還原型 NADP催化硫氧還蛋白還原的酶。EC1．6．4．5．。含有一個(gè)分子的FAD。使氧化型硫氧還蛋白的胱胺酸殘基還原，變成一對(duì)半胱胺酸殘基，后者進(jìn)一步成為核糖核苷酸還原的電子供體。它存在于大腸桿菌、酵母、肝臟以及腫瘤細(xì)胞中。 

實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人硫氧還蛋白還原酶（TrxR）水平。用純化的人硫氧還蛋白還原酶（TrxR）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入硫氧還蛋白還原酶（TrxR），再與HRP 標(biāo)記的硫氧還蛋白還原酶（TrxR）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的硫氧還蛋白還原酶（TrxR）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人硫氧還蛋白還原酶（TrxR）濃度。

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實(shí)驗(yàn)中需要注意：

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD 值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請(qǐng)避光保存。

7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

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