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血清使用的注意事項

時間:2011/4/25閱讀:1140
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1、血清必須貯存-20℃,如存放于4℃,請勿超過兩周,對于某些單位一次無法用完一瓶,可在無菌條件下將其40-45ml分裝于無菌50ml離心管中(或血清瓶中),由于血清解凍時體積會增加10%,必須預(yù)留此膨脹體積的空間,否則易發(fā)生污染或容器凍裂的情形。
2、一般公司所提供的血清一般為100ml和500ml裝量,因此建議在使用中宜采取逐步解凍的方法解凍血清:-20℃→4℃冰箱或冷庫溶解24小時→室溫下全溶后再分裝,一般以50 ml無菌離心管中分裝40-45ml。使用過程中要特別注意,必須規(guī)則地將血清搖晃均勻,小心勿造成氣泡,使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。勿直接由-20℃放置至37℃環(huán)境下解凍,因為溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而產(chǎn)生沉淀。
3、血清的滅活(heat-inactivation)一般是指56℃,30分鐘水浴加熱已*解凍的血清,加熱過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。此處理的目的是使血清中的補體成分(complement)去活化。但是,經(jīng)過滅活處理的血清會因而造成沉淀的顯著增多,且會影響血清的品質(zhì)。所以,有的公司所生的細胞培養(yǎng)用牛血清不做滅活處理,由客戶自行選擇。而診斷試劑用血清在除菌過濾前進行過滅活處理。
4、在使用血清的時候,勿將血清留置于37℃太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分會因而受到破壞,影響血清的品質(zhì)。
5、一般我們在使用過程中是先過濾培養(yǎng)基,再加血清,勿直接過濾血清。
6、血清的沉淀物:
(1)凝絮物:其產(chǎn)生的原因有多種,但普遍的原因是血清中的脂蛋白(lipoprotein)變形及解凍后血清中存在的纖維蛋白(fibrin)造成,這些凝絮沉淀物不會影響血清本身的品質(zhì)。除非必須,如果您想減少這些沉淀物,建議可用離心3000rpm,5min去除,或離心后取上清液加入培養(yǎng)基中一起除菌過濾。
(2)顯微鏡下觀察“小黑點”,通常經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點”,常會誤認為是血清遭受污染(如黑膠蟲),而將血清放置在37℃中欲培養(yǎng)此“微生物”,但37℃環(huán)境下,又會使此沉淀物增多,更會誤認為微生物的增殖,但以培養(yǎng)細菌的培養(yǎng)基檢測,又沒有污染。一般而言,此小黑點不會影響細胞的生長。
 

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