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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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植物赤霉素(GA)試劑盒說明書

時間:2011/8/23閱讀:677
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實驗原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中植物赤霉素(GA)水平。用純化的植物赤霉素(GA)
抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入植物赤霉素(GA)抗原,再
與 HRP 標記的赤霉素(GA)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加
底物TMB顯色。 TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。
顏色的深淺和樣品中的赤霉素(GA)呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD
值),通過標準曲線計算樣品中植物赤霉素(GA)濃度。
試劑盒組成:
試劑盒組成 48 孔配置 96 孔配置 保存
說明書 1 份 1 份
封板膜 2 片(48) 2 片(96)
密封袋 1 個 1 個
酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
標準品:135pmol/L 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存
標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶 1.5ml×1 瓶 2-8℃保存
酶標試劑 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
樣品稀釋液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
顯色劑A 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
顯色劑B液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
終止液 3ml×1 瓶 6ml×1 瓶 2-8℃保存
濃縮洗滌液 (20ml×20 倍)×1 瓶 (20ml×30 倍)×1 瓶 2-8℃保存
標本要求:
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟:
1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設(shè)標準品孔 10 孔,在*、第二孔中分別加標
準品 100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二
孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,2
混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔
中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各
取 50μl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl,混
勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準
品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,
濃度分別為90pmol/L,60pmol/L,30pmol/L,15pmol/L ,7.5pmol/L)。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣
品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣
品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混
勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液:將 30(48T的 20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的 20倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復(fù) 5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同 3。
8. 洗滌:操作同 5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進行。
注意事項:
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未
用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在5 分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線,做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值
大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。3
計算:
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,
在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD
值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋
倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標
準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值
代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋
倍數(shù),即為樣品的實際濃度。

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