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培養(yǎng)基生產(chǎn)和使用常見問題

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1.低血清培養(yǎng)基能用肉眼判斷其pH值嗎?
答:低血清培養(yǎng)基中酚紅的含量與普通培養(yǎng)基中的酚紅含量不同,不能通過肉眼觀察或通過經(jīng)驗來判定pH值,建議使用pH計進行測定。
2.*溶液和*的配制方法是什么?
答:以0.2mol/L的 L-*配制為例:稱取L-*2.92g,加注射用水100ml,充分攪拌混勻。用0.2μm濾膜正壓過濾除菌。溶液應在4℃下避光保存,2周內(nèi)使用。以7.5% NaHCO3的配制為例:稱取NaHCO37.5g溶于100ml蒸餾水中過濾除菌。
3.什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅?
答:酚紅在培養(yǎng)基中用作pH值的指示劑:中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時為紫色。酚紅本身對生物制品質量并不會產(chǎn)生影響,可以通過純化技術去除,但酚紅在無血清培養(yǎng)基可能帶來胞內(nèi)鈉/鉀失衡,影響細胞生長,當然這種作用能被血清所中和或減輕。酚紅并不是培養(yǎng)基中必需的一種成分,很多國外的疫苗或抗體生產(chǎn)企業(yè)在生產(chǎn)過程中都使用無酚紅培養(yǎng)基。
4.放置在冰箱中的培養(yǎng)基顏色會發(fā)生變化,為什么?
答:培養(yǎng)基保存于4℃冰箱中,培養(yǎng)基內(nèi)CO2 會逐漸溢出,造成培養(yǎng)基越來越偏堿性。而培養(yǎng)基中酸堿指示劑(通常為phenol red)的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿后再用于細胞培養(yǎng)將造成細胞生長停滯或死亡。培養(yǎng)基偏堿時,可以通入無菌過濾的CO2,以調(diào)整pH值。

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