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規(guī)格 | 5×105Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 組織來源 | 結腸組織 |
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貨號 | CS-X2840 | 細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 |
產品信息:
貨號 | CS-X2840 | 組織來源 | 結腸組織 |
傳代特性 | 可傳2-3代 | 培養(yǎng)基 | 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 |
細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
培養(yǎng)條件 | 換液頻率 | 每2-3天換液一次 |
商品介紹:
產品名稱:人結腸黏膜上皮細胞 3.產品規(guī)格:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介: 人結腸黏膜上皮細胞分離自結腸組織;結腸在右髂窩內續(xù)于盲腸,在第3骶椎平面連接直腸。結腸分升結腸、橫結腸、降結腸和乙狀結腸4部分,大部分固定于腹后壁,結腸的排列酷似英文字母“M",將小腸包圍在內。結腸橫切面由內到外依次為:黏膜(上皮層、固有層、黏膜肌層),黏膜下層(疏松結締組織),肌層(內環(huán)形、外縱行兩層平滑?。?,外膜(纖維膜或漿膜)。腸黏膜上皮細胞是機體內外環(huán)境的重要屏障,持續(xù)暴露于大量抗原中,也是機體面對病原微生物的第一道防線。因此,腸黏膜上皮細胞除有吸收、分泌和轉運等重要生理功能之外,在黏膜先天性和獲得性免疫防御機制中也起著重要作用。腸黏膜上皮細胞作為首先接觸抗原的細胞,在黏膜免疫反應的起始階段發(fā)揮關鍵作用,它決定黏膜免疫反應的發(fā)生、性質和強度。探討正常結腸黏膜上皮細胞的分離、體外培養(yǎng)方法,為研究腸黏膜上皮細胞以及與腸黏膜相關疾病建立合適的細胞模型。 5.方法簡介: 公司實驗室分離的人結腸黏膜上皮細胞采用先機械分離法、后膠原酶消化法并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測: 公司實驗室分離的人結腸黏膜上皮細胞經Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息: 包被條件 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) 培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 換液頻率 每2-3天換液一次 生長特性 貼壁 細胞形態(tài) 上皮細胞樣 傳代特性 可傳2-3代 消化液 0.25%yi蛋白酶 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% |
細胞保存方法:
(一)細胞凍存
1. 配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液;
2. 取對數(shù)生長期的細胞,去除舊培養(yǎng)液,用PBS清洗。
3. 去除PBS,加入適量(覆蓋培養(yǎng)皿表面)把單層生長的細胞消化下來;
4. 離心1000rpm,5min;
5. 去除,加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,用吸管輕輕吹打使細胞均勻,計數(shù),調節(jié)凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml~1×107/ml;
6. 將細胞分裝入凍存管中,每管1~1.5 ml;
7. 在凍存管上標明細胞的名稱,凍存時間及操作者;
8. 凍存:標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/ min;當溫度達-25℃以下時,可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時,則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ,然后放入-70℃冰箱中過夜,取出凍存管,移入液氮容器內。
注意事項:
1)、欲冷凍保存之細胞應在生長良好且存活率高之狀態(tài),約為80~90%致密度。冷凍前檢測細胞是否仍保有其性質,應在冷凍保存前一至二日測試是否有抗體之產生。
2)、細胞在液氮中可長期凍存無,而不會影響細胞活力;在-70度可保存數(shù)月。
3)、注意冷凍保護劑之品質。DMSO應為試劑級等級,無菌且無色(以0. 22micron FGLP Telflon過濾或是直接購買無菌產品,如Sigma D-2650),以5~10 ml小體積分裝,4 ℃避光保存,勿作多次解凍。Glycerol亦應為試劑級等級,以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開啟后一年內使用,因長期儲存后對細胞會有毒性。本方法中先制備雙倍凍存液,可避免DMSO直接加入時釋放的熱量對細胞的損傷。緩慢逐滴加入細胞懸液是使細胞逐步適應高滲,可降低細胞受損。DMSO可能引起部分白血病細胞株的分化,可換用10%甘油凍存。
公司正在出售的產品:
人子宮成纖維細胞 | 人氨基肽mei3(LAP3)檢測試劑盒 |
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人肺大靜脈內皮細胞 | 匙狀毛樣線蟲PCR檢測試劑盒 |
人肝動脈平滑肌細胞 | 河流弧菌PCR檢測試劑盒 |
操作步驟:
1)、冷凍前24-48小時更換半量或全量培養(yǎng)基,使細胞處于指數(shù)生長期。
2)、配制冷凍保存溶液(使用前配制):另取一離心管,加入培養(yǎng)基、血清,逐滴加入二甲基亞砜 (DMSO)至20%濃度,即制成雙倍的凍存液,置于室溫下待用。
3)、離心收集培養(yǎng)之細胞,用加血清的培養(yǎng)基重懸起細胞,取少量細胞懸浮液(約0. 1 ml)計數(shù)細胞濃度及凍前存活率。
4)、取與細胞懸液等量的凍存液,緩慢逐滴加入細胞懸液,并晃動試管,制成細胞凍存懸液(DMSO后濃度為5~10%),使細胞濃度為1~5×106cells/ ml,混合均勻,分裝于已標示之冷凍保存管中,1~2 ml/vial,并取少量細胞懸浮液作污染檢測。嚴密封口后,注明細胞名稱、代數(shù)、日期。然后進行凍存。
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