HLF-a (人肺細胞)

別稱 HLFA

年齡（性別） 54歲

組織來源 肺

生長特性 貼壁細胞

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

生物安全等級 1

生長培養(yǎng)基 MEM＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例 1:2-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

保藏機構(gòu) ATCC; CCL-199 ECACC; 90112703

細胞處理：

1）凍存細胞的復(fù)蘇：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達70%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。該細胞為懸浮和輕微的貼壁細胞，傳代可以參考以下方法：

1、收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。由于細胞貼壁不牢PBS潤洗后細胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中。

2、加入0.25％（w / v）0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3、將收集到的懸浮細胞、pbs清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例：

1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.

2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

操作步驟：

步驟1：從冰箱拿出無血清非程序凍存液，待用

步驟2：離心收集對數(shù)生長期的細胞（貼壁細胞消化下來離心，懸浮細胞直接離心，轉(zhuǎn)速1200rpm或250g，時間3min）

步驟3：棄上清，加入適量無血清非程序凍存液，重懸細胞

步驟4：按照1~1.5mL/管的量分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標記

步驟5：將凍存管直接移入-80℃冰箱中，24h后轉(zhuǎn)移至液氮長期保存

在沒有凍存盒或者非程序凍存液時，可以選擇手動梯度降溫。但手動梯度降溫不適用于所有細胞，且效果不穩(wěn)定，同樣需要先做凍存測試。

注意事項：

1、收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2、收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩(wěn)定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。

3、由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?，故本公司只保證客戶收到細胞后一周內(nèi)的細胞狀態(tài)，故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。

4、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
公司正在出售的產(chǎn)品：

Psi2 DAP (小鼠胚胎成纖維細胞)

兔膀胱成纖維細胞

人胰島β細胞

小鼠乳腺上皮細胞

大鼠乳腺上皮細胞

兔膀胱平滑肌細胞

人前列腺平滑肌細胞

小鼠胰腺上皮細胞

大鼠胰腺上皮細胞

兔氣管平滑肌細胞

人前列腺成纖維細胞

小鼠甲狀腺濾泡上皮細胞

大鼠甲狀腺濾泡上皮細胞

兔氣管上皮細胞

人甲狀腺濾泡上皮細胞

人胰島su樣因子3(INSL3)ELISA檢測試劑盒

人促胰液su/胰泌su(Secretin)檢測試劑盒

人氧化mei亞基5B,線粒體(COX5B)檢測試劑盒

大鼠可溶性CD30配體(sCD30L)試劑盒 ELISA

禽傳染性支氣管炎病毒Ark型RT-PCR試劑盒

人乳頭瘤病毒52b PCR試劑盒

乙型肝炎病毒通用型PCR檢測試劑盒

產(chǎn)氣腸桿菌PCR檢測試劑盒

粗球孢子菌PCR試劑盒

鴨腸炎病毒PCR試劑盒

胰闊圓盤吸蟲PCR試劑盒

HLF-a (人肺細胞)大腸桿菌0157熒光PCR檢測試劑盒

大腸桿菌通用PCR檢測試劑盒含致病性和非致病性

乙型副傷PCR檢測試劑盒

人類嗜淋巴細胞病毒型PCR檢測試劑盒