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上海宸功生物技術(shù)有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第10年

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細(xì)菌核糖體分離試劑盒說(shuō)明書(shū)

時(shí)間:2022/12/13閱讀:777
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細(xì)菌核糖體(ribosome)分離試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

 

主要用途

 

細(xì)菌核糖體ribosome分離試劑是一種旨在通過(guò)化學(xué)破膜以及差速超速離心處理方法,分離出完整而純化的70S核糖體組分的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適合于各種培養(yǎng)或臨床細(xì)菌菌株核糖體成分的分離。產(chǎn)品即到即用,操作簡(jiǎn)易,性能穩(wěn)定,無(wú)核酶和蛋白酶污染,萃取純度和產(chǎn)量皆高。 

 

技術(shù)背景

 

核糖體(ribosome)是一種細(xì)小顆粒的核糖蛋白復(fù)合物(ribonucleoprotein complex),生命細(xì)胞制造蛋白質(zhì)的非膜性結(jié)構(gòu)元素和轉(zhuǎn)譯裝置(translational apparatus),由RNA和蛋白質(zhì)組成,具有多肽轉(zhuǎn)移酶的活性,刺激RNA合成,并調(diào)節(jié)RNA、核糖體自身以及蛋白質(zhì)的生物合成。其分成2個(gè)亞體:大亞體和小亞體。核糖體通過(guò)大亞體結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)核糖體(tRNA),而小亞體結(jié)合信使RNAmRNA),然后閱讀RNA提供的信息,轉(zhuǎn)譯(translation)成氨基酸,連接成蛋白分子。真核生物的核糖體位于胞漿(游離核糖體)、線粒體和葉綠體中。其中胞漿核糖體為80S核糖體,由40S小亞體和60S大亞體組成:60S5S RNA、28S RNA、5.8S亞基和49個(gè)蛋白組成;而40S18S RNA33個(gè)蛋白組成。線粒體和葉綠體核糖體與原核生物相似,為70S核糖體,由30S小亞體和50S大亞體組成:50S包括5S、23S RNA34個(gè)蛋白;30S包括16S RNA21個(gè)蛋白。細(xì)菌核糖體成為抗菌藥物的靶標(biāo),其中50%以上抗菌素針對(duì)細(xì)菌核糖體。同時(shí)核糖體高度進(jìn)化保留,成為種系分類(lèi)(phylogenetic classification)的分子標(biāo)志。   

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

裂解液(Reagent A           毫升

保存液(Reagent B           毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)              1份

 

保存方式

 

保存在-20℃冰箱里,有效保證6

 

用戶自備

 

50毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管:用于樣品操作和保存的容器

臺(tái)式離心機(jī):用于樣品操作

超速離心機(jī):用于樣品操作

超聲儀:用于裂解細(xì)胞

渦旋震蕩儀:用于混勻

 

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,將試劑盒里的試劑置于冰槽里凍融備用。然后進(jìn)行下列操作。

 

1. 準(zhǔn)備50毫升細(xì)菌(OD600=0.2108細(xì)胞/毫升)

2. 轉(zhuǎn)移到50毫升錐形離心管

3. 進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心30分鐘,速度為3000g

4. 小心抽去上清液

5. 加入預(yù)冷的xx毫升裂解液Reagent A

6. 渦旋震蕩15秒,充分混勻

7. 超聲處理100瓦功率,20秒一次重復(fù)4

8. 置于冰槽里孵育30分鐘,期間每隔5分鐘渦旋震蕩15

9. 放進(jìn)4臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘,速度為15000g

10. 小心移取上清液到新的高速離心管

11. 放進(jìn)超速離心機(jī)離心15分鐘,速度為30000g

12. 小心移取上清液到新的高速離心管(注意:可以使用礦物油填滿離心管)

13. 放進(jìn)4超速離心機(jī)離心2小時(shí),速度為100000g

14. 小心取出離心管 

15. 小心抽去上清液

16. 加入500微升或xx毫升保存液(Reagent B,混勻顆粒群

17. 轉(zhuǎn)移到新的1.5毫升離心管

18. (選擇步驟)進(jìn)行核糖體定量測(cè)定 

19. 放進(jìn)-70冰箱里保存或置于冰槽里準(zhǔn)備后續(xù)操作

 

注意事項(xiàng)

 

1. 本產(chǎn)品為20次操作(5 X 109細(xì)胞/  

2. 建議使用足夠的細(xì)

3. 樣品操作均須在4或以下?tīng)顟B(tài)下進(jìn)行

4. 操作時(shí),須無(wú)菌操作,避免污染母液

5. 核糖體定量計(jì)算公式(微克/微升): A260 ? 11.1

6. 如果進(jìn)行核糖體蛋白萃取,建議使用純化核糖體蛋白質(zhì)萃取試劑盒HL16041

7. 本公司提供系列核糖體分析技術(shù)產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

1. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定分離的核糖體維持正?;钚?/span>

3. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定不含污染性蛋白酶和核酶



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