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上海宸功生物技術(shù)有限公司
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磷酸酶性比色法定量檢測試劑盒說明書

時間:2023/3/22閱讀:715
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主要用途

細(xì)胞磷酸酶(PTP)活性比色法定量檢測試劑是一種旨在使用特異性合成底物磷酸化肽,PTP去磷酸化后,釋放出游離磷酸根,由氨還原產(chǎn)鉬藍(lán)顯色反應(yīng)峰值的變化,采用比色法測定其峰值的變化,以此進行測算單位酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適合于各種細(xì)胞裂解懸液樣品包括免疫沉淀復(fù)合物和粗提或部分純化酶樣品蛋白磷酸化酶活性及其抑制劑的檢測。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞凋亡、蛋白組學(xué)、病理生理學(xué)、變等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶,嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,反應(yīng)優(yōu)化,檢測敏感。


技術(shù)背景


蛋白去磷酸化在于平衡細(xì)胞中激酶的作用,調(diào)節(jié)真核生物中各種不同的細(xì)胞生理活動,包括細(xì)胞繁殖與分化、分裂、代謝、收縮性、授精、學(xué)習(xí)和記憶、細(xì)胞間交流、細(xì)胞形態(tài)和遷移、基因轉(zhuǎn)錄、mRNA加工、分子運輸、胚胎發(fā)育、器官發(fā)育、組織內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、免疫功能等。一旦異常,會產(chǎn)生腫瘤和免疫缺陷性疾病。蛋白磷酸酶(protein tyrosine phosphatase;PTP;EC 3.1.3.48)屬于磷酸化酶家屬中的一員,由一組含有磷酸化(phosphotyrosine)四類酶組成,其功能在于移去蛋白質(zhì)上磷酸化殘基的磷酸基團,實現(xiàn)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)譯后修飾,使之蛋白質(zhì)之間相互反應(yīng)和細(xì)胞內(nèi)定位,影響蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性和活性,成為信號通路和細(xì)胞周期控制的主要調(diào)節(jié)元素,尤其在胰島素識別、軸突生長、血管生成、免疫反應(yīng)和炎癥反應(yīng)等發(fā)揮重要作用?;谔禺愋缘孜锪姿峄嚯腄ADEpYLIPQQG,受到蛋白氨酸酪磷酸酶的去磷酸化作用,釋放出游離磷酸根,由氨還原產(chǎn)生鉬藍(lán)顯色反應(yīng)后,在分光光度儀下(660nm波長)產(chǎn)生峰值的變化,由此測定磷酸酶的特異活性。\



保存方式


保存裂解液(Reagent B)、緩沖液(Reagent C)、反應(yīng)液(Reagent E)和顯色液(Reagent F)在-20℃冰箱里,避免反復(fù)凍融;其余的保存在4℃冰箱里;顯色液(Reagent F)具有腐蝕性,避免直接用手接觸; 有效保證6月



用戶自備

15毫升離心管:用于樣品處理的容器

1.5毫升離心管:用于樣品處理和保存的容器

細(xì)胞刮脫棒:用于貼壁細(xì)胞脫離

(微型)臺式離心機:用于樣品收集

培養(yǎng)箱:用于孵育反應(yīng)物

比色皿:用于比色的容器

分光光度儀:用于比色分析



注意事項

1. 本產(chǎn)品為25次操作,包括5(點)標(biāo)準(zhǔn)測定

2. 操作時,須戴手套

3. 系統(tǒng)操作過程中,標(biāo)準(zhǔn)曲線測定只需1

4. 顯色液(Reagent F具有腐蝕性,避免直接用手接觸

5. 樣品切忌使用磷酸緩沖液/脫氧膽酸納、SDSEDTA、EGTA、巰基乙醇等處理

6. 如果使用免疫沉淀復(fù)合物作為待測樣品,建議使用通用型蛋白免疫共沉淀(蛋白A樹脂)試劑盒-30029.1

7. 比色測定后,比色皿須清洗

8. 如果用戶沒有660nm波長,可以使用600660nm的任一波長替代

9. 吸光讀數(shù)增高,表明具有酶活性

10. 建議待測樣本蛋白濃度為100微克/20微升;如果樣本酶活性過低或過高,則可以增加或降低樣本量; (本公司提供 BCA蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-30031.1

11. 可以使用PTP抑制劑氟化鈉NaF)作為抑制劑對照或陰性對照

12. 蛋白氨酸酪磷酸化酶活性單位濃度定義:在30℃下,pH 5.2的情況下,每單位酶在單位時間內(nèi)(每分鐘)釋放1微摩爾的磷

13. 本公司提供系列蛋白磷酸酶檢測試劑產(chǎn)品




使用承諾

本公司秉著信譽至上、客戶滿意、質(zhì)量承諾"的宗旨為我們的用戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后,應(yīng)按照產(chǎn)品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定,保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問題,請立即以書面形式(實驗報告)與本公司聯(lián)系,并將該產(chǎn)品退回,經(jīng)檢驗確系產(chǎn)品質(zhì)量所致,本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯誤操作所致,本公司不承擔(dān)由此造成的損失。



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