主要用途

細(xì)胞磷酸酶（PTP）活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在使用特異性合成底物磷酸化多肽，在PTP去磷酸化后，釋放出游離磷酸根，由氨還原產(chǎn)生鉬藍(lán)顯色反應(yīng)后峰值的變化，采用比色法測(cè)定其峰值的變化，以此進(jìn)行測(cè)算單位酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種細(xì)胞裂解懸液樣品包括免疫沉淀復(fù)合物和粗提或部分純化酶樣品的蛋白磷酸化酶活性及其抑制劑的檢測(cè)。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞凋亡、蛋白組學(xué)、病理生理學(xué)、變等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶，嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，反應(yīng)優(yōu)化，檢測(cè)敏感。

技術(shù)背景

蛋白去磷酸化在于平衡細(xì)胞中激酶的作用，調(diào)節(jié)真核生物中各種不同的細(xì)胞生理活動(dòng)，包括細(xì)胞繁殖與分化、分裂、代謝、收縮性、授精、學(xué)習(xí)和記憶、細(xì)胞間交流、細(xì)胞形態(tài)和遷移、基因轉(zhuǎn)錄、mRNA加工、分子運(yùn)輸、胚胎發(fā)育、器官發(fā)育、組織內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、免疫功能等。一旦異常，會(huì)產(chǎn)生腫瘤和免疫缺陷性疾病。蛋白磷酸酶（protein tyrosine phosphatase；PTP；EC 3.1.3.48）屬于磷酸化酶家屬中的一員，由一組含有磷酸化（phosphotyrosine）四類酶組成，其功能在于移去蛋白質(zhì)上磷酸化殘基的磷酸基團(tuán)，實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)譯后修飾，使之蛋白質(zhì)之間相互反應(yīng)和細(xì)胞內(nèi)定位，影響蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性和活性，成為信號(hào)通路和細(xì)胞周期控制的主要調(diào)節(jié)元素，尤其在胰島素識(shí)別、軸突生長(zhǎng)、血管生成、免疫反應(yīng)和炎癥反應(yīng)等發(fā)揮重要作用。基于特異性底物磷酸化多肽DADEpYLIPQQG，受到蛋白氨酸酪磷酸酶的去磷酸化作用，釋放出游離磷酸根，由氨還原產(chǎn)生鉬藍(lán)顯色反應(yīng)后，在分光光度儀下（660nm波長(zhǎng)）產(chǎn)生峰值的變化，由此測(cè)定磷酸酶的特異活性。\

保存方式

保存裂解液（Reagent B）、緩沖液（Reagent C）、反應(yīng)液（Reagent E）和顯色液（Reagent F）在－20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融；其余的保存在4℃冰箱里；顯色液（Reagent F）具有腐蝕性，避免直接用手接觸； 有效保證6月

用戶自備

15毫升離心管：用于樣品處理的容器

1.5毫升離心管：用于樣品處理和保存的容器

細(xì)胞刮脫棒：用于貼壁細(xì)胞脫離

（微型）臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品收集

培養(yǎng)箱：用于孵育反應(yīng)物

比色皿：用于比色的容器

分光光度儀：用于比色分析

注意事項(xiàng)

1． 本產(chǎn)品為25次操作，包括5次（點(diǎn)）標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定

2． 操作時(shí)，須戴手套

3． 系統(tǒng)操作過(guò)程中，標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定只需1條

4． 顯色液（Reagent F）具有腐蝕性，避免直接用手接觸

5． 樣品切忌使用磷酸緩沖液/脫氧膽酸納、SDS、EDTA、EGTA、巰基乙醇等處理

6． 如果使用免疫沉淀復(fù)合物作為待測(cè)樣品，建議使用通用型蛋白免疫共沉淀（蛋白A樹(shù)脂）試劑盒－30029.1

7． 比色測(cè)定后，比色皿須清洗

8． 如果用戶沒(méi)有660nm波長(zhǎng)，可以使用600至660nm的任一波長(zhǎng)替代

9． 吸光讀數(shù)增高，表明具有酶活性

10． 建議待測(cè)樣本蛋白濃度為100微克/20微升；如果樣本酶活性過(guò)低或過(guò)高，則可以增加或降低樣本量； （本公司提供 BCA蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－30031.1）

11． 可以使用PTP抑制劑氟化鈉（NaF）作為抑制劑對(duì)照或陰性對(duì)照

12． 蛋白氨酸酪磷酸化酶活性單位濃度定義：在30℃溫度下，pH 5.2的情況下，每單位酶在單位時(shí)間內(nèi)（每分鐘）釋放1微摩爾的磷

13． 本公司提供系列蛋白磷酸酶檢測(cè)試劑產(chǎn)品

使用承諾

本公司秉著“信譽(yù)至上、客戶滿意、質(zhì)量承諾"的宗旨為我們的用戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后，應(yīng)按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷(xiāo)售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定，保證說(shuō)明書(shū)所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問(wèn)題，請(qǐng)立即以書(shū)面形式（實(shí)驗(yàn)報(bào)告）與本公司聯(lián)系，并將該產(chǎn)品退回，經(jīng)檢驗(yàn)確系產(chǎn)品質(zhì)量所致，本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯(cuò)誤操作所致，本公司不承擔(dān)由此造成的損失。