亚洲国产精品二区久久,日本美女后入式午夜视频在线观看,国产污视频在线观看,欧美日韩国产精品中文字幕在线观看

上海宸功生物技術(shù)有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第10年

18918128223

細(xì)胞CDK1/CYCLIN B激酶活性光度法定量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

時(shí)間:2024/7/29閱讀:1324
分享:

細(xì)胞CDK1/CYCLIN B激酶活性光度法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

 

主要用途

 

細(xì)胞CDK1/CYCLIN B激酶活性光度法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)多肽底物,受到CDK1/CYCLIN B酸化后,進(jìn)而由丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶連續(xù)循環(huán)法反應(yīng)系統(tǒng),測(cè)定產(chǎn)生ADP過(guò)程中,伴隨的還原型腺嘌呤二核苷酸(NADH)的氧化反應(yīng), 即采用光度法測(cè)定其氧化后峰值的變化,以分析細(xì)胞裂解樣品中CDK1/CYCLIN B特異活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的其適用于各種細(xì)胞裂解萃取液樣品(動(dòng)物、人體)、部分或純化酶樣品中CDK1/CYCLIN B激酶的特異活性定量檢測(cè),以及抑制劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,高度敏感。

 

技術(shù)背景

 

細(xì)胞周期素依賴(lài)性激酶1cyclin dependent kinase 1;CDK1),又稱(chēng)為細(xì)胞分裂周期蛋白2cell division cycle2;CDC2)或p34cdk1,屬于激酶(serine/threonine protein kinase)家屬成員之一。其為高度進(jìn)化保留的激酶復(fù)合物,成熟促進(jìn)因子(maturation promoting factor;MRF)中的催化亞體,含有297氨基酸,與細(xì)胞周期素B結(jié)合,允許細(xì)胞由G2期進(jìn)入有絲分裂期以及由G1期進(jìn)入DNA合成期,達(dá)到調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、DNA復(fù)制、細(xì)胞分裂等。其磷酸化目標(biāo)序列為 GGGRSPGRRRRK。基于底物GGGRSPGRRRRK,在ATP的存在下,受到CDK1/CYCLIN B激酶的磷酸化,獲得產(chǎn)物磷酸化多肽,進(jìn)而通過(guò)丙酮酸激酶(pyruvate kinase;PK)和乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase;LDH)反應(yīng)系統(tǒng)中,還原型腺嘌呤二核苷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotideNADH)轉(zhuǎn)化為氧化型腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide;NAD),其吸光峰值的變化340nm,來(lái)定量分析細(xì)胞周期素依賴(lài)性激酶1/細(xì)胞周期素B的特異活性其反應(yīng)方式為:

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

清理液(Reagent A         毫升

裂解液(Reagent B         毫升

緩沖液(Reagent C          毫升

酶促液(Reagent D          微升

反應(yīng)液(Reagent E          微升

底物液(Reagent F         微升

陰性液(Reagent G          微升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)               1

 

保存方式

 

保存清理液(Reagent A4冰箱里;其余的保存在-20冰箱里,嚴(yán)格避免光照和反復(fù)凍融;有效保證6

 

用戶(hù)自備

 

CDK1/CYCLIN B激酶:用于抑制劑篩選

1.5毫升離心管:用于樣品保存的容器

15毫升錐形離心管:用于樣品處理的容器

細(xì)胞刮脫棒:用于貼壁細(xì)胞脫離

(微型)臺(tái)式離心機(jī):用于細(xì)胞預(yù)處理

100微升1厘米光徑比色皿或96孔板:用于光度分析操作的容器

分光光度儀或酶標(biāo)儀:用于樣品光度分析

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

一、 待測(cè)樣品準(zhǔn)備

 

1. 準(zhǔn)備好25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶或60mm細(xì)胞培養(yǎng)皿的待測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞(15 X 106細(xì)胞)

2. 小心加入xx毫升清理液(Reagent A,覆蓋生長(zhǎng)表面

3. 小心抽去清理液

4. 使用細(xì)胞刮脫棒輕柔刮脫細(xì)胞(注意:避免使用消化

5. 加入xx毫升清理液(Reagent A,混勻細(xì)胞

6. 移入到預(yù)冷的15毫升錐形離心管(注意:懸浮細(xì)胞從這一步驟開(kāi)始

7. 放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為300g

8. 小心抽去上清液

9. 加入xx微升裂解液(Reagent B,充分混勻

10. 轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的1.5毫升離心管

11. 強(qiáng)力渦旋震蕩15

12. 置于冰槽里孵育30分鐘

13. 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415

14. 小心移取500微升上清液到新的預(yù)冷的1.5毫升離心管

15. 移取10微升進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)(注意:建議使用 Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-30030.1

16. 即刻放進(jìn)-70保存或置于冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作

 

二、 測(cè)定準(zhǔn)備

 

1. 準(zhǔn)備好待測(cè)樣品(例如細(xì)胞裂解懸液等),置于冰槽里 

2. 設(shè)定好分光光度儀(溫度為30℃):波長(zhǎng)為340nm,間隔1分鐘,讀數(shù)6次(共5分鐘),并置零

三、 背景對(duì)照測(cè)定

 

1. 移取65微升緩沖液(Reagent C到新的比色皿

2. 加入10微升酶促液(Reagent D

3. 加入10微升反應(yīng)液(Reagent E

4. 加入10微升底物液(Reagent F

5. 放進(jìn)30培養(yǎng)箱里靜置3分鐘

6. 加入5微升陰性液(Reagent G

7. 上下傾倒數(shù)次,混勻(限定在3秒之內(nèi))

8. 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè),此為背景空對(duì)照:340波長(zhǎng)讀數(shù)0分鐘 340波長(zhǎng)讀數(shù)5分鐘

 

四、 樣品測(cè)定

 

1. 移取xx微升緩沖液(Reagent C到新的比色皿

2. 加入xx微升酶促液(Reagent D

3. 加入xx微升反應(yīng)液(Reagent E

4. 加入xx微升底物液(Reagent F

5. 放進(jìn)30培養(yǎng)箱里靜置3分鐘

6. 加入5微升待測(cè)樣品(注意:50微克細(xì)胞裂解蛋白;樣品須溶解

7. 上下傾倒數(shù)次,混勻(限定在3秒之內(nèi))

8. 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè),此為樣品總活性讀數(shù):340波長(zhǎng)讀數(shù)0分鐘 340波長(zhǎng)讀數(shù)5分鐘

 

會(huì)員登錄

×

請(qǐng)輸入賬號(hào)

請(qǐng)輸入密碼

=

請(qǐng)輸驗(yàn)證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~
撥打電話(huà)
在線留言
亚洲中文字幕二区不卡| 国产成人无码AV一区二区三区| 西西大尺度无码免费视频| 亚洲 欧美 日韩 主播| 女人逼逼出水视频| 国产乱色国产精品免费播放| 无遮挡粉嫩久久久久久久| 偷窥国内肥臀老熟女视频| 美女被大屌操大骚逼| 最新黄色A级一短片| 国产成人无码91精品一区| 国产一国产一级毛片无码视频百度| 多男用舌头伺候一女| 亚洲 自拍 欧美 一区| 福利国产第一视频| 69国产精品久久久久久人| 天天摸天天添人人澡| 国产乱理伦片在线观看夜| 精品人妻一区二区三区日产乱码| 97青青草免费在线观看| 一级风流国产片a级| 欧美日韩一级视频| 99热这里只有精品98| 日本入室强伦姧人妻中文| 99久久精品国产一区二区成人了| 天天舔操操操av| 欧美成人3p视频| 夫妻性生活视频在线直播| 大黑屌爆操日本女人| 美女被大屌操大骚逼| 黄色亚洲一级大片| 搬开女人下面使劲插视频| 精品精品国产一区二区性色av| 美女人的逼免费观看| 国产午夜福利片无码视频| 国产A级黄片下载| 久久久精品日韩一区二区三区| 在线观看免费视频a v| 国产一国产一级毛片无码视频百度| 美女的粉嫩小逼视频特写| 色偷偷影音先锋男人av|