HL80016.1 v.A

石蠟切片平滑肌細胞α平滑肌肌動蛋白（α-SMA）免疫組化染色試劑盒

產(chǎn)品說明書

主要用途

石蠟切片平滑肌細胞α平滑肌肌動蛋白（α-SMA）免疫組化染色試劑是一種旨在使用標準化的化學方法，包括石蠟分離、抗原修復等，以及免疫抗體顯色技術，即通過抗α平滑肌肌動蛋白單克隆抗體以及辣根過氧化物酶綴合物二抗，使用染料二氨基聯(lián)苯胺染色顯示棕褐色，從存檔中的石蠟包埋的組織切片中分析α平滑肌肌動蛋白表達和分布狀況的而經(jīng)典的技術方法。該技術經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。主要適用于各種人體、大鼠、小鼠等石蠟包埋組織（肌肉、乳腺組織、子宮組織等）切片的平滑肌細胞α平滑肌肌動蛋白測定。廣泛用于平滑肌細胞識別、分化、異常病變的研究。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，反應敏感，操作簡捷，性能穩(wěn)定。

技術背景

肌動蛋白（actin）在所有真核細胞普遍表達，高度保留的蛋白，構成細胞骨架的主要元素之一。肌動蛋白有6個亞型，在心肌、骨骼肌、平滑肌以及非肌肉細胞的胞漿中表達，調節(jié)收縮潛力、控制細胞的結構和運動。其中4個亞型成為肌肉組織細胞的分化標志。α平滑肌肌動蛋白（α-SMA）是平滑肌細胞分化的標志。主要在血管平滑肌細胞表達，受到激素和細胞繁殖的調節(jié)。腫瘤轉化和動脈粥樣硬化會引起α平滑肌肌動蛋白表達異常。使用抗α平滑肌肌動蛋白單克隆抗體可以識別在各種組織，包括乳腺、唾液腺、汗腺、支氣管腺體、平滑肌、血管平滑肌、子宮基質、前列腺基質（stroma）細胞、周細胞（pericyte）、軟骨細胞等正?；蚰[瘤組織的平滑肌細胞或α平滑肌肌動蛋白及其各種分化，包括成肌纖維細胞（myofibroblast）、肌上皮細胞（myoepithelial）等。通過抗α平滑肌肌動蛋白單克隆抗體以及辣根過氧化物酶綴合物二抗（Peroxidase conjugated antibody）反應，進而使用染料二氨基聯(lián)苯胺染色顯示α平滑肌肌動蛋白細胞為棕褐色。

產(chǎn)品內(nèi)容

脫蠟液（Reagent A）                 毫升

補水液A（Reagent B）         毫升

補水液B（Reagent C）         毫升

補水液C（Reagent D）         毫升

補水液D（Reagent E）         毫升

清理液（Reagent F）          毫升

酶解液（Reagent G）          毫升

封阻液（Reagent H）          毫升

一抗液（Reagent I）          毫升

二抗液（Reagent J）          毫升

顯色液A（Reagent K）         微升

顯色液B（Reagent L）         毫升

產(chǎn)品說明書             1份

保存方式

保存酶解液（Reagent G）、一抗液（Reagent I）、二抗液（Reagent J）和顯色液A（Reagent K）在－20℃冰箱里，嚴格避免反復凍融，其余的保存在4℃冰箱里；二抗液（Reagent J）和顯色液A（Reagent K），避免光照；有效保證3月

用戶自備

小型染色缸：用于石蠟切片的脫蠟和染色操作

光學顯微鏡：用于細胞染色后觀察分析

特別注意

1． 顯色液A（Reagent K）和顯色液B（Reagent L）必須在實驗操作前即刻混勻；混勻后切忌久放不用或儲存后備用；用完扔掉

2． 顯色液A（Reagent K）如果出現(xiàn)沉淀，須過濾后再用

3． 石蠟包埋前，組織切片須用1％多聚甲醛或常規(guī)固定液4℃條件下，固定16小時，否則組織易脫落

實驗步驟

一、 脫蠟處理

1． 取出10片待測的石蠟包埋的6微米厚組織切片（注意：石蠟包埋前，組織切片須用1％多聚甲醛4℃條件下，固定16小時，此步很重要）

2． 按下表依次放進小染色缸里孵育

3． 小心移去切片上的補水液D（Reagent E）

4． 小心加上xx微升清理液（Reagent F）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面

5． 室溫下孵育5分鐘

6． 小心移去切片上的清理液（Reagent F）

二、 蛋白消解處理

1． 小心加上xx微升酶解液（Reagent G），鋪滿整個切片樣品表面

2． 室溫下孵育5分鐘

3． 小心移去切片上的酶解液（Reagent G）

4． 室溫下，將切片置入xx毫升清理液（Reagent F）中孵育5分鐘

5． 小心移去切片上的清理液（Reagent F）

6． 小心加上xx微升封阻液（Reagent H），鋪滿整個切片樣品表面

7． 室溫下孵育5分鐘

8． 小心移去切片上的封阻液（Reagent H）

9． 室溫下，將切片置入xx毫升清理液（Reagent F）中孵育5分鐘

10． 小心移去切片上的清理液（Reagent F）

三、 免疫標記處理

1． 小心加上xx微升含有一抗液（Reagent I），鋪滿整個切片樣品表面

2． 在37℃濕潤的培養(yǎng)箱里，孵育1小時，保持濕潤，避免干燥（注意：可以使用蓋玻片蓋上孵育）

3． 小心移去切片上的一抗液（Reagent I）

4． 室溫下，小心將切片置入xx毫升清理液（Reagent F）中孵育2分鐘

5． 小心移去切片上的清理液（Reagent F）

四、 樣本染色處理

在染色前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的顯色液A（Reagent K）置入冰槽里融化，然后移取xx微升顯色液A（Reagent K）和1.8毫升顯色液B（Reagent L）到2毫升離心管，充分混勻，標記為顯色工作液，置于暗室。然后進行下列操作：

1． 小心加上xx微升二抗液（Reagent J）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面（注意：可以使用蓋玻片蓋上孵育）

2． 室溫下孵育30分鐘，避免光照

3． 小心移去切片上的二抗液（Reagent J）

4． 室溫下，小心將切片置入xx毫升清理液（Reagent F）中孵育2分鐘

5． 小心移去切片上的清理液（Reagent F）

6． 小心加上xx微升含有顯色液A（Reagent K）和顯色液B（Reagent L）的顯色工作液，鋪滿整個切片樣品表面

7． 室溫下孵育5至30分鐘，或直至樣本出現(xiàn)棕褐色

8． 小心移去切片上含有顯色液A（Reagent K）和顯色液B（Reagent L）的顯色工作液

9． 室溫下，小心將切片置入xx毫升清理液（Reagent F）中浸泡5秒

10． 小心移去切片上的清理液（Reagent F）

11． （選擇步驟）進行甲基綠復染（建議使用甲基綠復染試劑盒)

12． 放上蓋玻片或封片

13． 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：陽性細胞呈現(xiàn)棕褐色

注意事項

1． 本產(chǎn)品為10次操作

2． 操作時須戴手套，以防污染

3． 石蠟包埋前，組織切片須用1％多聚甲醛或常規(guī)固定液4℃條件下，固定16小時，否則造成樣品支離破碎

4． 清理液（Reagent F）50毫升置于小型染色缸里，可重復使用

5． 所有操作在室溫下進行

6． 每次更換試劑溶液時，保持切片面基本晾干。空氣中晾干狀態(tài)為沒有水滴，呈濕潤狀態(tài)，可見反光

7． 試劑溶液在切片表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿切片表面

8． 細胞顯色，避免過度，密切目測觀察，控制時間

9． 細胞顯色完成后，即刻進行光學顯微鏡觀察

10． 本公司提供系列平滑肌細胞檢測試劑產(chǎn)品

質量標準

1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰