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上海宸功生物技術(shù)有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第10年

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氨基糖類(lèi)總量摩根-艾爾森比色法定量 檢測(cè)試劑盒

時(shí)間:2017/1/17閱讀:2226
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氨基糖類(lèi)(amino sugar)總量摩根-艾爾森(MORGAN-ELSON)比色法定量

檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

 

主要用途

 

氨基糖類(lèi)(amino sugar)總量摩根-艾爾森(MORGAN-ELSON)比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)堿性加熱處理后,產(chǎn)生顯色素,與歐立希試劑反應(yīng),生成紫紅色產(chǎn)物,即采用比色法測(cè)算氨基糖類(lèi)總量而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心改良摩根-艾爾森(MORGAN-ELSON)方法、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適用于各種細(xì)胞、組織裂解懸液和各種體液樣品中氨基糖類(lèi)總量檢測(cè)。產(chǎn)品即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,檢測(cè)敏感

 

技術(shù)背景

 

氨基糖類(lèi)(amino sugar)是一類(lèi)含有氨基替代羥基的糖,目前發(fā)現(xiàn)有60多種,例如氨基葡萄糖(glucosamine)、氨基半乳糖(galactosamine),以及衍生物乙?;被咸烟牵╝cetylglucosamine)、唾液酸(sialic acid),和抗菌化合物氨基糖苷(aminoglycoside)等。氨基糖類(lèi)是地球上zui古老和zui豐富的有機(jī)化合物之一。其中氨基葡萄糖是糖基化蛋白生物合成的前體,甲殼綱動(dòng)物(crustacean)體外骨骼和真菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)成分。自然存在于動(dòng)物骨組織、骨髓、真菌細(xì)胞壁和貝類(lèi)動(dòng)物殼上。作為食物補(bǔ)充劑,有助于關(guān)節(jié)的結(jié)構(gòu)和功能,尤其是骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis)患者。氨基半乳糖是糖蛋白類(lèi)激素,例如卵泡刺激素(follicle stimulating hormone;FSH)、促黃體激素(luteinizing hormone;LH)的成分,具有肝毒性。在堿性條件下,通過(guò)加熱處理,形成顯色素(chromogen),進(jìn)而與歐立希試劑(Ehrlichs reagent),即酸性對(duì)二甲基氨基苯甲醛(N,N-dimethyl p-aminobenzaldehyde)反應(yīng),產(chǎn)生紫紅色復(fù)合物,在分光光度儀(530nm 波長(zhǎng))下出現(xiàn)吸光峰值的變化,來(lái)定量測(cè)定樣品中氨基糖類(lèi)量的總含量。 

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

堿性液(Reagent A)     毫升

反應(yīng)液(Reagent B     毫升

標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent C     微升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)     1

 

保存方式

 

保存在4冰箱里;試劑具有腐蝕性,注意操作安全;有效保證3

 

用戶自備

 

1.5毫升離心管:用于標(biāo)準(zhǔn)樣品配制和反應(yīng)的容器

15毫升錐形離心管:用于樣品反應(yīng)操作的容器

沸水裝置:用于反應(yīng)孵育

比色皿:用于比色的容器

分光光度儀:用于比色分析

實(shí)驗(yàn)步驟

 

一、標(biāo)準(zhǔn)樣品配制

 

  • 準(zhǔn)備好4個(gè)1.5毫升離心管,標(biāo)記為15號(hào)管
  • 分別加入xx微升堿性液(Reagent A到每個(gè)離心管
  • 移取xx微升標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent C1號(hào)管,混勻
  • 小心移取xx微升1號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent C2號(hào)管,混勻
  • 小心移取xx微升2號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent C3號(hào)管,混勻
  • 14號(hào)管放進(jìn)冰槽里備用,避免光照;標(biāo)準(zhǔn)管濃度見(jiàn)下表

 

管號(hào)

 標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent C

堿性液(Reagent A

測(cè)定體系中

標(biāo)準(zhǔn)氨基葡萄糖含量

1

xx微升

xx微升

xx微克

2

xx微升1號(hào)管

xx微升

xx微克

3

xx微升2號(hào)管

xx微升

xx微克

4

——

xx微升

0

 

  • 樣品測(cè)定

 

  • 設(shè)定好分光光度儀:波長(zhǎng)530nm,并置零
  • 分別移取xx毫升堿性液(Reagent A)到15毫升離心管
  • 分別加入20微升上述制備的標(biāo)準(zhǔn)樣品或待測(cè)樣品,混勻
  • 沸水煮沸1小時(shí)
  • 分別加入xx毫升反應(yīng)液(Reagent B,混勻
  • 室溫下冷卻10分鐘,避免光照
  • 轉(zhuǎn)移到新的比色皿
  • 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè)(530nm波長(zhǎng)):獲得吸光讀數(shù)
  • 構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線:縱座標(biāo)(Y軸)為吸光讀數(shù);橫座標(biāo)(X軸)為標(biāo)準(zhǔn)氨基葡萄糖含量微克
  • 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)氨基葡萄糖含量(微克)
  • 計(jì)算樣品實(shí)際氨基糖類(lèi)濃度(微克/毫升) 

 

 

注意事項(xiàng)

 

  • 本產(chǎn)品為25次操作,包括標(biāo)準(zhǔn)液
  • 本產(chǎn)品檢測(cè)范圍為5至20微克糖類(lèi)總量
  • 操作時(shí),須戴手套
  • 試劑具有腐蝕性,注意操作安全
  • 孵育時(shí),避免光照
  • 如果待測(cè)樣品濃度過(guò)高或過(guò)低,可以稀釋樣品用量;注意在計(jì)算實(shí)際濃度時(shí),不要忘記稀釋倍數(shù)調(diào)整
  • 糖類(lèi)總量表述方式:微克氨基糖/毫升;微克氨基糖/細(xì)胞量;微克氨基糖/總蛋白量
  • 本公司提供系列糖類(lèi)檢測(cè)試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感

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