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HL10277.1 v.A
細胞骨架(肌動蛋白微絲;F-ACTIN)綠色熒光染色試劑盒產(chǎn)品說明書
主要用途
細胞骨架(肌動蛋白微絲;F-ACTIN)綠色熒光染色試劑是一種旨在使用異硫氰酸熒光素標記的鬼筆環(huán)肽(phalloidin),探尋細胞骨架的絲狀肌動蛋白的分布和局部定向變化狀況的而經(jīng)典的技術方法。該技術經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。主要適用于各種活體細胞(動物、人體、植物等)的細胞骨架裝配的檢測。產(chǎn)品嚴格無菌,即到即用,反應敏感,操作簡捷,性能穩(wěn)定。
技術背景
肌動蛋白(actin)是42KD的球蛋白,構成細胞骨架的微絲(microfilament)和肌肉收縮裝置的細肌絲(thin filament),以及細胞膜表面?zhèn)巫悖?/span>pseudopodia)和微絨毛(microvilli)。肌動蛋白存在于所有真核生物細胞中,且高度進化保留,參與各種重要細胞功能,包括細胞遷移、細胞分裂、肌肉收縮、細胞形態(tài)維護、膜轉運(membrane trafficking) 等。哺乳動物具有六種異構體,分成α、β、γ三類。球狀肌動蛋白(G-actin)在生理條件下,組合成長絲聚合體,轉化為絲狀肌動蛋白(F-actin),形成細胞骨架的微絲。肌動蛋白的聚合與解聚的動態(tài)學變化是細胞骨架裝配(cytoskeleton assembly)的主要參數(shù)之一。鬼筆環(huán)肽(phalloidin)是一種由毒性菇類中分離的二環(huán)七肽(bicyclic heptapeptide)生物堿,與聚合的微絲(F-肌動蛋白)結合,因此通過異硫氰酸熒光素(FITC)標記的鬼筆環(huán)肽可以體外探測細胞F-肌動蛋白的分布和含量,據(jù)此分析細胞骨架裝配的調(diào)控機制。
產(chǎn)品內(nèi)容
清理液(Reagent A) 毫升
固著液(Reagent B) 毫升
通透液(Reagent C) 毫升
封阻液(Reagent D) 毫升
染色液(Reagent E) 微升
復染液(Reagent F) 微升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存染色液(Reagent E)和復染液(Reagent F)在-20℃冰箱里,避免反復凍融;其余的保存在4℃冰箱里,避免光照;有效保證6月
用戶自備
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液(12024):用于細胞脫離
*細胞培養(yǎng)液(12052):用于中和胰蛋白酶的處理
15毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器
1.5毫升離心管:用于細胞染色的容器
(微型)臺式離心機:用于樣品操作
熒光(共聚焦)顯微鏡:用于細胞熒光觀察
實驗步驟
實驗開始前,將-20℃冰箱里的試劑置于室溫下凍融。移取xx微升通透液(Reagent C)到1.5毫升離心管,然后分別加入xx微升染色液(Reagent E)和復染液(Reagent F),混勻后,標記為染色工作液,置于冰槽里,放進暗室里備用。然后進行下列操作。
綠色熒光顯示F-肌動蛋白;藍色熒光顯示細胞核為圓環(huán)或橢圓狀
綠色熒光顯示F-肌動蛋白;藍色熒光顯示細胞核為圓環(huán)或橢圓狀射
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