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HL70017.6 v.A
乙酰膽堿酯酶活性抑制劑篩選比色法檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書
主要用途
乙酰膽堿酯酶活性抑制劑篩選比色法檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)乙酰膽堿酯酶反應(yīng)系統(tǒng)中,在抑制劑存在與否的情況下,所釋放出巰基膽堿,與Ellman試劑反應(yīng)后,產(chǎn)生黃色5-巰基-2-硝基苯甲酸產(chǎn)物,出現(xiàn)吸光峰值的變化,即采用比色法來(lái)評(píng)價(jià)樣品酶活抑制能力的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種抑制劑篩選檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。
技術(shù)背景
乙酰膽堿酯酶(Acetylcholinesterase;AchE;EC3.1.1.7),又稱為紅細(xì)胞膽堿酯酶(RBC cholinesterase),廣泛存在于真核生物,包括某些植物,尤其在腦組織、神經(jīng)肌肉連接處(neuromuscular junction)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的膽堿能突觸(cholinergic synapses)和紅細(xì)胞膜上高度表達(dá),催化主要的神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)乙酰膽堿的水解反應(yīng),產(chǎn)生乙酸和膽堿,終止突觸傳導(dǎo)。其功能在于調(diào)節(jié)乙酰膽堿作用。例如有機(jī)磷紗林(Sarin),抑制乙酰膽堿酯酶活性,導(dǎo)致神經(jīng)肌肉癱瘓,zui終發(fā)生窒息(asphyxiation)。血清乙酰膽堿酯酶濃度顯著降低與有機(jī)磷殺蟲劑中毒有關(guān),因此血液檢測(cè)是環(huán)境污染的重要指標(biāo)。基于人工合成底物碘化硫代乙酰膽堿(acetylthiocholine iodide),在抑制劑存在與否的情況下,通過(guò)乙酰膽堿酯酶的作用,水解產(chǎn)生乙酸和硫代膽堿(thiocholine),與Ellman試劑5,5-二硫基-雙(2-硝基苯甲酸)[5,5’-dithiobis-(2-nitrobenzoic acid);DTNB]反應(yīng)后,產(chǎn)生黃色的5-巰基-2-硝基苯甲酸(5-thio-2-nitrobenzoic acid;TNB),通過(guò)其吸收峰值的變化(412nm波長(zhǎng)),來(lái)定量分析乙酰膽堿酯酶抑制劑的效應(yīng)。乙酰膽堿酯酶反應(yīng)系統(tǒng)為:
產(chǎn)品內(nèi)容
緩沖液(Reagent A) 毫升
反應(yīng)液(Reagent B) 毫升
底物液(Reagent C) 毫升
陰性液(Reagent D) 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書 1份
保存方式
保存在-20℃冰箱里;反應(yīng)液(Reagent B)和底物液(Reagent C)避免光照;有效保證6月
用戶自備
乙酰膽堿酯酶:用于抑制劑篩選
1.5毫升離心管:用于樣品操作的容器
比色皿或酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀或酶標(biāo)儀:用于比色分析
實(shí)驗(yàn)步驟
內(nèi)容物 | 空背景對(duì)照 | 樣本背景 | *酶活性 | 待測(cè)抑制劑酶活性 |
緩沖液(Reagent A) | xx微升 | xx微升 | xx微升 | xx微升 |
陰性液(Reagent D) | xx微升 | xx微升 | xx微升 | —— |
待測(cè)抑制劑 | —— | xx微升 | ―― | xx微升 |
用戶自備的純化酶 | —— | —— | xx微升(1毫單位) | xx微升(1毫單位) |
96孔板每孔總量 | 空背景對(duì)照孔 (xx微升) | 樣本背景孔 (xx微升) | *活性孔 (xx微升) | 待測(cè)抑制劑樣品孔 (xx微升) |
輕輕搖動(dòng)酶標(biāo)板,混勻,放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里孵育30分鐘。然后進(jìn)行下列操作 |
注意事項(xiàng)
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
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請(qǐng)輸驗(yàn)證碼
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