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細(xì)胞逆轉(zhuǎn)錄酶(REVERSE TRANSCRIPTASE)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品說(shuō)明書(中文版)
主要用途
細(xì)胞逆轉(zhuǎn)錄酶(REVERSE TRANSCRIPTASE)活性熒光定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)雙鏈分子底物,在dTTP的參與下,通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄酶的催化,聚合產(chǎn)生RNA-DNA異源雙鏈DNA分子,由PicoGreen特異染色,即采用熒光法來(lái)測(cè)定細(xì)胞裂解樣品中酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞裂解懸液樣品(動(dòng)物、人體、昆蟲等)逆轉(zhuǎn)錄酶的活性,以及抑制劑檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。
技術(shù)背景
逆轉(zhuǎn)錄酶(REVERSE TRANSCRIPTASE;EC2.7.7.49),又稱為RNA依賴性DNA聚合酶(RNA-dependent DNA polymerase),是將單鏈RNA分子轉(zhuǎn)錄為雙鏈DNA的DNA聚合酶,包括HIV逆轉(zhuǎn)錄酶、莫洛尼氏鼠白血病病毒(Moloney murine leukemia virus;MMLV)逆轉(zhuǎn)錄酶、禽類成髓細(xì)胞瘤病毒(avian myeloblastosis virus;AMV)逆轉(zhuǎn)錄酶、端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(omerase reverse transcriptase) 等。逆轉(zhuǎn)錄病毒使用逆轉(zhuǎn)錄酶達(dá)到逆轉(zhuǎn)錄RNA為DNA,然后整合到宿主基因組再?gòu)?fù)制。在真核生物中,端粒酶是一種逆轉(zhuǎn)錄酶。逆轉(zhuǎn)錄酶在分子生物學(xué)中得到廣泛運(yùn)用。檢測(cè)逆轉(zhuǎn)錄酶活性成為病毒感染的監(jiān)測(cè)手段,同時(shí)作為藥物篩選的靶標(biāo)。基于由poly-A模板與oligo-dT引物構(gòu)成的雙鏈分子底物,在dTTP的參與下,通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄酶的催化,聚合產(chǎn)生RNA-DNA異源雙鏈DNA分子(heteroduplexes),由PicoGreen特異染色,根據(jù)熒光強(qiáng)度分析(激發(fā)波長(zhǎng)480nm,散發(fā)波長(zhǎng)520nm),來(lái)定量測(cè)定逆轉(zhuǎn)錄酶的活性。
產(chǎn)品內(nèi)容
清理液(Reagent A) | 毫升 |
裂解液(Reagent B) | 毫升 |
緩沖液(Reagent C) | 毫升 |
底物液(Reagent D) | 微升 |
終止液(Reagent E) | 微升 |
染色液(Reagent F) | 微升 |
稀釋液(Reagent G) | 毫升 |
標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent H) | 微升 |
產(chǎn)品說(shuō)明書 | 1份 |
保存方式
保存清理液(Reagent A)在4℃冰箱里;其余的保存在-20℃冰箱里;染色液(Reagent F)避免光照;有效保證6月
用戶自備
1.5毫升離心管:用于樣品保存的容器
15毫升錐形離心管:用于樣品制備的容器
細(xì)胞刮脫棒:用于細(xì)胞脫離
DOUNCE勻漿器:用于裂解組織
臺(tái)式離心機(jī):用于樣品操作
比色皿或酶標(biāo)板:用于熒光分析的容器
熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀:用于熒光分析
實(shí)驗(yàn)步驟
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的裂解液(Reagent B)置入冰槽里融化。然后進(jìn)行下列操作。
管號(hào) | 裂解液(Reagent B) | 標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent H) | 測(cè)定體系標(biāo)準(zhǔn)DNA濃度 |
1 | xx微升 | xx微升 | xx納克/毫升 |
2 | xx微升 | xx微升1號(hào)管 | xx納克/毫升 |
3 | xx微升 | xx微升2號(hào)管 | xx納克/毫升 |
4 | xx微升 | xx微升3號(hào)管 | xx納克/毫升 |
5 | xx微升 | 0 | 0 |
三、標(biāo)準(zhǔn)曲線構(gòu)建
測(cè)定開(kāi)始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的染色液(Reagent F)置入冰槽里融化,然后移出2.5微升到新的1.5毫升離心管,加入xx微升稀釋液(Reagent G),輕柔混勻后,置于冰槽里,標(biāo)記為反應(yīng)工作液(注意:5次操作量),放在暗室里備用。然后進(jìn)行下列操作
四、樣品測(cè)定
測(cè)定開(kāi)始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的染色液(Reagent F)置入冰槽里融化,然后移出2.5微升到新的1.5毫升離心管,加入xx微升稀釋液(Reagent G),輕柔混勻后,置于冰槽里,標(biāo)記為反應(yīng)工作液(注意:5次操作量),放在暗室里備用。然后進(jìn)行下列操作
注意事項(xiàng)
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
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請(qǐng)輸入密碼
請(qǐng)輸驗(yàn)證碼
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