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上海宸功生物技術(shù)有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第10年

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血液S腺苷同型半胱氨酸酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒

時(shí)間:2017/1/18閱讀:1382
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血液S腺苷同型半胱氨酸(SAH或AdoHcy)酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒

產(chǎn)品說明書

 

主要用途

 

血液S腺苷同型半胱氨酸(SAH或AdoHcy)酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑是一種旨在通過腺苷同型半胱氨酸核苷酶、腺嘌呤脫氨酶和黃嘌呤氧化酶應(yīng)系統(tǒng)中生成過氧化氫,使用顯色染料和過氧化酶后,產(chǎn)生醌亞胺產(chǎn)物吸光峰值的變化,即采用比色法來測定血液裂解樣品中S腺苷同型半胱氨酸含量而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的其適用于動(dòng)物和人體血液樣品(血漿等)S腺苷同型半胱氨酸的定量檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。

 

技術(shù)背景

 

S腺苷同型半胱氨酸(S-adenosyl-L-homocysteine;SAH或AdoHcy),化學(xué)全稱為5-S-(3-Amino-3-carboxy propyl)-5-thioadenosine)是一碳代謝和細(xì)胞甲基化反應(yīng)的重要分子之一,也是半胱氨酸合成的中間產(chǎn)物。其分子量384.41,分子式為C14H20N6O5SSAH對(duì)于甲基轉(zhuǎn)移酶具有高度的親和力。SAH通過S-腺苷甲硫氨酸(S-Adenosylmethionine;SAM或AdoMet)去甲基化產(chǎn)生。SAH是評(píng)價(jià)細(xì)胞甲基化潛力和代謝狀況的重要指標(biāo)。機(jī)體內(nèi)的SAH含量顯著低于SAM。一旦SAH含量升高,即SAM/SAH比例降低,則引起DNA甲基化不足,染色體構(gòu)像改變,抑制細(xì)胞甲基轉(zhuǎn)移酶活力,干擾同型半胱氨酸和腺嘌呤的清除,進(jìn)一步導(dǎo)致基因表達(dá)和信號(hào)傳導(dǎo)異常,以及免疫缺陷等。基于底物S腺苷同型半胱氨酸(S-adenosylhomocysteine;AdoHcy),快速被腺苷同型半胱氨酸核苷酶(AdoHcy nucleosidase)分解為S-核糖同型半胱氨酸(S-ribosylhomo cysteine)和腺嘌呤(adenine),腺嘌呤腺嘌呤脫氨酶Adenine deaminase)產(chǎn)生次黃嘌呤,通過黃嘌呤氧化酶(xanthine oxidase)催化,生成過氧化氫,然后借助過氧化酶(peroxidase)的作用,與對(duì)羥基苯甲酸p-hydroxybenzoic acid)和氨基安替比林4-aminoantipyrine)反應(yīng),形成有色醌亞胺quinoneimine,通過其吸收峰值的變化510nm波長),來定量分析S腺苷同型半胱氨酸的含量。反應(yīng)系統(tǒng)為:

 

                                

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

去干擾液(Reagent A)

微升

緩沖液(Reagent B)

毫升

底物液(Reagent C)

微升

反應(yīng)液(Reagent D)

微升

陰性液(Reagent E)

微升

說明書

1份

 

保存方式

 

保存去干擾液(Reagent A)在4冰箱里,其余的保存在-20冰箱里;底物液(Reagent C避免光照;有效保證6

 

用戶自備

 

抗凝:用于血液采集的容器

1.5毫升離心管:用于樣品操作和保存的容器

微型臺(tái)式離心機(jī):用于樣品操作

恒溫培養(yǎng)箱或水槽:用于反應(yīng)孵育

比色皿或96孔板:用于比色的容器

分光光度儀或酶標(biāo)儀:用于比色分析

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

  • 樣品準(zhǔn)備

 

  • 準(zhǔn)備好肝素抗凝管
  • 抽取1毫升血液,置于抗凝管里
  • 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為700g或3000RPM,例如eppendorf 5415
  • 小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血漿成分(注意:避免觸碰白色液體層
  • (選擇步驟)移取10微升進(jìn)行蛋白定量測定 
  • 移取200微升血漿到新的1.5毫升離心管
  • 加入xx微升去干擾液(Reagent A),混勻
  • 放進(jìn)冰槽里孵育30分鐘
  • 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘,速度為16000g13000RPM,例如eppendorf 5415
  • 移取上清液到新的1.5毫升離心管
  • 即刻置于冰槽里備用或放進(jìn)-70℃冰箱里保存

 

  • 測定準(zhǔn)備

 

  • 開啟并設(shè)定好分光光度儀(溫度為37℃):波長510nm,并置零 
  • 從-20℃冰箱里取出試劑,置于冰槽里融化;底物液(Reagent C避免光照
  • 緩沖液(Reagent B室溫下均衡溫度

 

 

 

  • 背景對(duì)照測定

 

  • 移取xx微升緩沖液(Reagent B到新的比色皿
  • 加入xx微升陰性液(Reagent E
  • 加入xx微升底物液(Reagent C
  • 加入xx微升反應(yīng)液(Reagent D 
  • 上下傾倒數(shù)次,混勻
  • 放進(jìn)37恒溫培養(yǎng)箱或水浴孵育20分鐘
  • 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測,此為背景空對(duì)照 

 

  • 樣品測定

 

  • 加入xx微升緩沖液(Reagent B
  • 加入20微升待測樣品(100微克蛋白)(注意:樣品須清澈
  • 加入xx微升底物液(Reagent C
  • 加入xx微升反應(yīng)液(Reagent D
  • 上下傾倒數(shù)次,混勻
  • 放進(jìn)37恒溫培養(yǎng)箱或水浴孵育20分鐘
  • 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測,此為樣品讀數(shù) 

 

五、計(jì)算樣品濃度

 

 

  • 酶標(biāo)儀測定

 

  • 96孔板上做好相應(yīng)標(biāo)記:背景對(duì)照和樣品
  • 分別加入xx微升緩沖液(Reagent B
  • 分別加入xx微升陰性液(Reagent E待測樣品(100微克蛋白)到相應(yīng)孔(注意:樣品須清澈)
  • 分別加入xx微升底物液(Reagent C
  • 分別加入xx微升反應(yīng)液(Reagent D
  • 輕輕搖動(dòng)96孔板
  • 放進(jìn)37恒溫培養(yǎng)箱孵育20分鐘
  • 即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀檢測
  • 濃度計(jì)算:

 

 

 

注意事項(xiàng)

 

  • 本產(chǎn)品為20次操作,包括背景對(duì)照
  • 如果檢測紅細(xì)胞中的SAH濃度,建議使用細(xì)胞S腺苷同型半胱氨酸(SAH或AdoHcy)酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒
  • 使用1厘米光徑的比色皿
  • 操作時(shí),須戴手套
  • 系統(tǒng)操作過程中,背景測定只需1次
  • 樣品中避免使用DTT、巰基乙醇、TCEP、EDTA等
  • 建議使用血漿樣品為佳
  • 樣品須澄清,至關(guān)重要
  • 測定值由低到高變化
  • 比色測定后,比色皿須清洗*
  • 建議待測樣本蛋白濃度為100微克/20微升
  • 如果待測樣品濃度過高或過低,可以調(diào)整樣品濃度
  • 參考值:人體血漿SAM約155納摩爾/升;SAH約20納摩爾/升;SAM/SAH比值約為8.5
  • 本公司提供系列醫(yī)學(xué)生化檢測試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感

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