細胞糖原硫酸蒽酮比色法定量檢測試劑盒
產(chǎn)品說明書

主要用途
細胞糖原硫酸蒽酮比色法定量檢測試劑是一種旨在通過乙醇去脂、酸化水解等處理后，水解產(chǎn)生葡萄糖單
體，與硫酸蒽酮反應(yīng)，生成藍綠色產(chǎn)物，即采用比色法測算糖原含量的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)
過精心研制、成功實驗證明的。適用于各種細胞（動物、人體、植物等）裂解懸液樣品糖原含量的檢測。
產(chǎn)品即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，檢測敏感。
技術(shù)背景
糖原（glycogen）是以α-1,4主鏈，α-1,6旁鏈形式的葡萄糖多聚體。作為動物體內(nèi)主要的短期能量儲備分
子，糖原由肝臟和肌肉生成，并存在于皮膚、肝臟、甲狀旁腺（parathyroid gland）、骨骼肌和心肌中。異常
利用糖原常見于糖尿病和遺傳性糖原存儲疾病（ genetic glycogen storage disease ） 等?；谳焱?br />（9,10-Dihydro-9-oxoan-thracene；Anthranone）可以與游離的已糖或多糖中的已糖基、戊糖基及已糖醛酸發(fā)
生反應(yīng)的原理，糖原分子受到酸性水解后，產(chǎn)生葡萄糖，與硫酸蒽酮反應(yīng)，生成藍綠色產(chǎn)物，在分光光度
儀（620nm 波長）下出現(xiàn)吸光峰值的變化，來定量測定樣品中糖原的含量。
產(chǎn)品內(nèi)容
清理液（Reagent A） ml
堿性液（Reagent B） ml
水解液（Reagent C） ml
萃取液（Reagent D） ml
凈化液（Reagent E） ml
酸性液（Reagent F） ml
染色液（Reagent G） ml
標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent H） μl
說明書1 份
保存方式
保存在4℃冰箱里；試劑具有腐蝕性，注意操作安全； 染色液（Reagent G）避免光照；有效保證6 月
用戶自備
1.5 毫升離心管：用于標(biāo)準(zhǔn)樣品配制和反應(yīng)的容器
2 毫升離心管：用于樣品操作的容器
15 毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
細胞刮脫棒：用于貼壁細胞脫離
（微型）臺式離心機：用于樣品制備
干式恒溫儀或恒溫水槽：用于反應(yīng)孵育
比色皿：用于比色的容器
2
分光光度儀：用于比色分析
實驗步驟
一、樣品準(zhǔn)備
1． 準(zhǔn)備好25cm2 細胞培養(yǎng)瓶或60mm 細胞培養(yǎng)皿的待測培養(yǎng)細胞（1X 106 細胞）
2． 小心加入xx 毫升清理液（Reagent A），覆蓋生長表面
3． 小心抽去清理液
4． 使用細胞刮脫棒輕柔刮脫細胞（注意：可以使用胰酶消化）
5． 加入xx 毫升清理液（Reagent A），混勻細胞
6． 移入到預(yù)冷的15 毫升錐形離心管（注意：懸浮細胞從這一步驟開始）
7． 放進4℃臺式離心機離心5 分鐘，速度為300g
8． 小心抽去上清液
9． 加入xx 微升堿性液（Reagent B）
10．渦旋震蕩15 秒
11．轉(zhuǎn)移到2 毫升離心管
12．放進100℃干式恒溫儀孵育10 分鐘
13．放進冰槽里孵育5 分鐘
14．加入xx 微升預(yù)冷的水解液（Reagent C）
15．渦旋震蕩15 秒
16．加入xx 毫升萃取液（Reagent D）
17．置于冰槽里孵育30 分鐘
18．放進4℃微型臺式離心機離心10 分鐘，速度為3000g（或5500RPM，例如eppendorf 5415）
19．小心抽去上清液
20．加入xx 毫升凈化液（Reagent E）
21．渦旋震蕩15 秒
22．放進4℃微型臺式離心機離心10 分鐘，速度為3000g（或5500RPM，例如eppendorf 5415）
23．小心抽去上清液
24．加入xx 微升酸性液（Reagent F）
25．渦旋震蕩15 秒
26．放進100℃干式恒溫儀孵育10 分鐘
27．放進冰槽里孵育5 分鐘
28．即刻置于冰槽里備用
二、標(biāo)準(zhǔn)樣品配制
1． 準(zhǔn)備好5 個1.5 毫升離心管，標(biāo)記為1 至5 號管
2． 分別加入xx 微升清理液（Reagent A）到每個離心管
3． 移取xx 微升標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent H）到1 號管，混勻
4． 小心移取xx 微升1 號管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent H）到2 號管，混勻
5． 小心移取xx 微升2 號管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent H）到3 號管，混勻
6． 小心移取200 微升3 號管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent H）到4 號管，混勻
7． 將1 至5 號管放進冰槽里備用，避免光照；標(biāo)準(zhǔn)管濃度見下表
3
管號標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent H） 清理液（Reagent A） 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖濃度
1 xx 微升xx 微升xx 微克/毫升
2 xx 微升1 號管xx 微升xx 微克/毫升
3 xx 微升2 號管xx 微升xx 微克/毫升
4 xx 微升3 號管xx 微升xx 微克/毫升
5 —— xx 微升0
三、樣品測定
1． 設(shè)定好分光光度儀：波長620nm，并置零
2． 分別移取xx 微升染色液（Reagent G）到1.5 毫升離心管
3． 分別加入200 微升上述制備的標(biāo)準(zhǔn)樣品或待測樣品
4． 上下傾倒混勻
5． 煮沸10 分鐘
6． 室溫下冷卻10 分鐘，避免光照
7． 轉(zhuǎn)移到新的比色皿
8． 即刻放進分光光度儀檢測（620nm 波長）：獲得吸光讀數(shù)
9． 構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線：縱座標(biāo)（Y 軸）為吸光讀數(shù)；橫座標(biāo)（X 軸）為標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖濃度（微克/毫升）
10．根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對應(yīng)葡萄糖濃度（微克/毫升）
11．計算樣品實際葡萄糖濃度（微克/毫升）
注意事項
1． 本產(chǎn)品為25 次操作，包括標(biāo)準(zhǔn)液
2． 操作時，須戴手套
3． 試劑具有腐蝕性，注意操作安全
4． 孵育時，避免光照
5． 如果待測樣品濃度過高或過低，可以調(diào)整樣品用量；注意在計算實際濃度時，不要忘記調(diào)整計算公式
6． 糖原濃度表述方式：
7． 本公司提供系列醫(yī)學(xué)生化檢測試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感