細(xì)胞三磷酸腺苷酶活性染色試劑盒

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)（中文版）

主要用途

細(xì)胞三磷酸腺苷酶（ATP酶）活性染色試劑是一種旨在使用鈣激活技術(shù)，在堿性條件下，由三磷酸腺苷酶催化水解產(chǎn)生的磷酸與鈣離子結(jié)合，經(jīng)過(guò)氯化鈷的替換，zui后在硫化銨存在的情況下，呈現(xiàn)細(xì)胞樣本中酶活性部位的棕黑色沉淀現(xiàn)象的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心改良、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于各種動(dòng)物和人體細(xì)胞ATP酶的活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，靈敏牢固，顯色清晰。

技術(shù)背景

三磷酸腺苷酶或ATP酶（adenosinetriphosphatase；ATPase）可催化ATP水解生成ADP及無(wú)機(jī)磷的反應(yīng)，這一反應(yīng)放出大量能量，用于運(yùn)送離子進(jìn)出細(xì)胞，同時(shí)供給生物體進(jìn)行需能生命過(guò)程。它存在于生物細(xì)胞的多個(gè)部位，比如細(xì)胞質(zhì)膜上和葉綠體類(lèi)囊體膜上等，對(duì)整個(gè)生命的維持有著重要的作用。膜結(jié)合ATP酶存在多種形式：鈉鉀ATP酶、胞膜鈣泵ATP酶（plasma membrane calcium ATPase；PMCA）或肌質(zhì)網(wǎng)/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣泵ATP酶（sarcoplasmic or endoplasmic reticulum calcium ATPases；SERCA）、氫鉀ATP酶（hydrogen/potassium ATPase）或胃質(zhì)子泵（gastric proton pump）等。

產(chǎn)品內(nèi)容

保存方式

保存反應(yīng)液（Reagent B）在－20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

用戶(hù)自備

蘇木素復(fù)染試劑盒：用于常規(guī)染色后復(fù)染

培養(yǎng)箱：用于反應(yīng)孵育

光學(xué)顯微鏡：用于染色后觀察分析

實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將試劑盒里的反應(yīng)液（Reagent B）從－20℃的冰箱里取出，放進(jìn)冰槽里融化，避免光照。然后進(jìn)行下列操作：

操作一、25cm²細(xì)胞培養(yǎng)瓶染色

• 樣本激活處理

• 小心抽去25cm²細(xì)胞培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)液
• 小心加入xx毫升堿性液（Reagent A）鋪滿(mǎn)整個(gè)樣品表面
• 小心抽去堿性液（Reagent A）
• 小心加入x毫升反應(yīng)液（Reagent B），鋪滿(mǎn)整個(gè)樣品表面
• 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里，孵育30分鐘
• 小心抽去反應(yīng)液（Reagent B）
• 小心加入xx毫升激活液（Reagent C），鋪滿(mǎn)整個(gè)樣品表面
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去 激活液（Reagent C）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟7至9二次

二、樣本染色處理

• 小心加入xx毫升置換液（Reagent D），鋪滿(mǎn)整個(gè)樣品表面
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去置換液（Reagent D）
• 小心加入xx毫升清理液（Reagent E）
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去清理液（Reagent E）
• 小心加入xx毫升顯色液（Reagent F），鋪滿(mǎn)整個(gè)樣品表面
• 室溫下孵育30至60秒；或直至可見(jiàn)棕黑色
• 小心抽去顯色液（Reagent F）
• 小心加入xx毫升清理液（Reagent E）
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去清理液（Reagent E）

• （選擇步驟）樣本復(fù)染處理

• 樣本復(fù)染處理（蘇木素）
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：酶活性陽(yáng)性部位呈現(xiàn)深淺不一的棕黑色（如果復(fù)染，則細(xì)胞核為藍(lán)色）

操作二、24孔細(xì)胞培養(yǎng)板染色

• 樣本激活處理

• 小心抽去24孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液
• 小心加入xx微升堿性液（Reagent A），鋪滿(mǎn)整個(gè)樣品表面
• 小心抽去堿性液（Reagent A）
• 小心加入xx微升反應(yīng)液（Reagent B），鋪滿(mǎn)整個(gè)樣品表面
• 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里，孵育30分鐘
• 小心抽去反應(yīng)液（Reagent B）
• 小心加入xx微升激活液（Reagent C），鋪滿(mǎn)整個(gè)樣品表面
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去激活液（Reagent C）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟7至9二次

二、樣本染色處理

• 小心加入xx微升置換液（Reagent D），鋪滿(mǎn)整個(gè)樣品表面
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去置換液（Reagent D）
• 小心加入xx微升清理液（Reagent E）
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去清理液（Reagent E）
• 小心加入xx微升顯色液（Reagent F），鋪滿(mǎn)整個(gè)樣品表面
• 室溫下孵育30至60秒；或直至可見(jiàn)棕黑色
• 小心抽去顯色液（Reagent F）
• 小心加入xx微升清理液（Reagent E）
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去清理液（Reagent E）

• （選擇步驟）樣本復(fù)染處理

• 樣本復(fù)染處理（蘇木素）
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：酶活性陽(yáng)性部位呈現(xiàn)深淺不一的棕黑色（如果復(fù)染，則細(xì)胞核為藍(lán)色）

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為50次（2個(gè)24孔板）或10次（10個(gè)25cm²細(xì)胞培養(yǎng)瓶）操作
• 操作時(shí)，須帶手套
• 每次更換試劑溶液時(shí)，須抽干殘留液體
• 整個(gè)操作，在避光狀態(tài)下進(jìn)行
• 細(xì)胞染色注意不要過(guò)度
• 避免使用有機(jī)溶劑（乙醇、二甲苯等）脫水、澄清處理
• 細(xì)胞染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察
• 本產(chǎn)品適合各種規(guī)格的培養(yǎng)細(xì)胞：載玻片，載玻片培養(yǎng)皿，35mm培養(yǎng)皿，和各種培養(yǎng)孔板，須相應(yīng)調(diào)整試劑溶液：

• 本公司提供系列組織細(xì)胞酶活性染色試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰