細胞三磷酸腺苷酶活性染色試劑盒
產(chǎn)品說明書(中文版)
主要用途
細胞三磷酸腺苷酶(ATP酶)活性染色試劑是一種旨在使用鈣激活技術(shù),在堿性條件下,由三磷酸腺苷酶催化水解產(chǎn)生的磷酸與鈣離子結(jié)合,經(jīng)過氯化鈷的替換,zui后在硫化銨存在的情況下,呈現(xiàn)細胞樣本中酶活性部位的棕黑色沉淀現(xiàn)象的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良、成功實驗證明的。主要適用于各種動物和人體細胞ATP酶的活性檢測。產(chǎn)品嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,靈敏牢固,顯色清晰。
技術(shù)背景
三磷酸腺苷酶或ATP酶(adenosinetriphosphatase;ATPase)可催化ATP水解生成ADP及無機磷的反應,這一反應放出大量能量,用于運送離子進出細胞,同時供給生物體進行需能生命過程。它存在于生物細胞的多個部位,比如細胞質(zhì)膜上和葉綠體類囊體膜上等,對整個生命的維持有著重要的作用。膜結(jié)合ATP酶存在多種形式:鈉鉀ATP酶、胞膜鈣泵ATP酶(plasma membrane calcium ATPase;PMCA)或肌質(zhì)網(wǎng)/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣泵ATP酶(sarcoplasmic or endoplasmic reticulum calcium ATPases;SERCA)、氫鉀ATP酶(hydrogen/potassium ATPase)或胃質(zhì)子泵(gastric proton pump)等。
產(chǎn)品內(nèi)容
堿性液(Reagent A) | 毫升 |
反應液(Reagent B) | 毫升 |
激活液(Reagent C) | 毫升 |
置換液(Reagent D) | 毫升 |
清理液(Reagent E) | 毫升 |
顯色液(Reagent F) | 毫升 |
產(chǎn)品說明書 | 1份 |
保存方式
保存反應液(Reagent B)在-20℃冰箱里,避免反復凍融,避免光照;其余的保存在4℃冰箱里,有效保證6月
用戶自備
蘇木素復染試劑盒:用于常規(guī)染色后復染
培養(yǎng)箱:用于反應孵育
光學顯微鏡:用于染色后觀察分析
實驗步驟
實驗開始前,將試劑盒里的反應液(Reagent B)從-20℃的冰箱里取出,放進冰槽里融化,避免光照。然后進行下列操作:
操作一、25cm2細胞培養(yǎng)瓶染色
- 小心抽去25cm2細胞培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)液
- 小心加入xx毫升堿性液(Reagent A)鋪滿整個樣品表面
- 小心抽去堿性液(Reagent A)
- 小心加入x毫升反應液(Reagent B),鋪滿整個樣品表面
- 放進37℃培養(yǎng)箱里,孵育30分鐘
- 小心抽去反應液(Reagent B)
- 小心加入xx毫升激活液(Reagent C),鋪滿整個樣品表面
- 室溫下孵育2分鐘
- 小心抽去 激活液(Reagent C)
- 重復實驗步驟7至9二次
二、樣本染色處理
- 小心加入xx毫升置換液(Reagent D),鋪滿整個樣品表面
- 室溫下孵育2分鐘
- 小心抽去置換液(Reagent D)
- 小心加入xx毫升清理液(Reagent E)
- 室溫下孵育2分鐘
- 小心抽去清理液(Reagent E)
- 小心加入xx毫升顯色液(Reagent F),鋪滿整個樣品表面
- 室溫下孵育30至60秒;或直至可見棕黑色
- 小心抽去顯色液(Reagent F)
- 小心加入xx毫升清理液(Reagent E)
- 室溫下孵育2分鐘
- 小心抽去清理液(Reagent E)
- 樣本復染處理(蘇木素)
- 即刻在一般光學顯微鏡下觀察:酶活性陽性部位呈現(xiàn)深淺不一的棕黑色(如果復染,則細胞核為藍色)
操作二、24孔細胞培養(yǎng)板染色
- 小心抽去24孔細胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液
- 小心加入xx微升堿性液(Reagent A),鋪滿整個樣品表面
- 小心抽去堿性液(Reagent A)
- 小心加入xx微升反應液(Reagent B),鋪滿整個樣品表面
- 放進37℃培養(yǎng)箱里,孵育30分鐘
- 小心抽去反應液(Reagent B)
- 小心加入xx微升激活液(Reagent C),鋪滿整個樣品表面
- 室溫下孵育2分鐘
- 小心抽去激活液(Reagent C)
- 重復實驗步驟7至9二次
二、樣本染色處理
- 小心加入xx微升置換液(Reagent D),鋪滿整個樣品表面
- 室溫下孵育2分鐘
- 小心抽去置換液(Reagent D)
- 小心加入xx微升清理液(Reagent E)
- 室溫下孵育2分鐘
- 小心抽去清理液(Reagent E)
- 小心加入xx微升顯色液(Reagent F),鋪滿整個樣品表面
- 室溫下孵育30至60秒;或直至可見棕黑色
- 小心抽去顯色液(Reagent F)
- 小心加入xx微升清理液(Reagent E)
- 室溫下孵育2分鐘
- 小心抽去清理液(Reagent E)
- 樣本復染處理(蘇木素)
- 即刻在一般光學顯微鏡下觀察:酶活性陽性部位呈現(xiàn)深淺不一的棕黑色(如果復染,則細胞核為藍色)
注意事項
- 本產(chǎn)品為50次(2個24孔板)或10次(10個25cm2細胞培養(yǎng)瓶)操作
- 操作時,須帶手套
- 每次更換試劑溶液時,須抽干殘留液體
- 整個操作,在避光狀態(tài)下進行
- 細胞染色注意不要過度
- 避免使用有機溶劑(乙醇、二甲苯等)脫水、澄清處理
- 細胞染色完成后,即刻進行光學顯微鏡觀察
- 本產(chǎn)品適合各種規(guī)格的培養(yǎng)細胞:載玻片,載玻片培養(yǎng)皿,35mm培養(yǎng)皿,和各種培養(yǎng)孔板,須相應調(diào)整試劑溶液:
操作容器 | 建議試劑溶液規(guī)格 |
載玻片 | 100微升 |
載玻片培養(yǎng)皿 | 1毫升 |
35mm培養(yǎng)皿 | 1毫升 |
96孔培養(yǎng)板 | 100微升 |
48孔培養(yǎng)板 | 200微升 |
24孔培養(yǎng)板 | 500微升 |
12孔培養(yǎng)板 | 1毫升 |
6孔培養(yǎng)板 | 2毫升 |
25cm2細胞培養(yǎng)瓶 | 3毫升 |
- 本公司提供系列組織細胞酶活性染色試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標準
- 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
- 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰