細胞三磷酸腺苷酶活性染色試劑盒

產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

細胞三磷酸腺苷酶（ATP酶）活性染色試劑是一種旨在使用鈣激活技術(shù)，在堿性條件下，由三磷酸腺苷酶催化水解產(chǎn)生的磷酸與鈣離子結(jié)合，經(jīng)過氯化鈷的替換，zui后在硫化銨存在的情況下，呈現(xiàn)細胞樣本中酶活性部位的棕黑色沉淀現(xiàn)象的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良、成功實驗證明的。主要適用于各種動物和人體細胞ATP酶的活性檢測。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，靈敏牢固，顯色清晰。

技術(shù)背景

三磷酸腺苷酶或ATP酶（adenosinetriphosphatase；ATPase）可催化ATP水解生成ADP及無機磷的反應，這一反應放出大量能量，用于運送離子進出細胞，同時供給生物體進行需能生命過程。它存在于生物細胞的多個部位，比如細胞質(zhì)膜上和葉綠體類囊體膜上等，對整個生命的維持有著重要的作用。膜結(jié)合ATP酶存在多種形式：鈉鉀ATP酶、胞膜鈣泵ATP酶（plasma membrane calcium ATPase；PMCA）或肌質(zhì)網(wǎng)/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣泵ATP酶（sarcoplasmic or endoplasmic reticulum calcium ATPases；SERCA）、氫鉀ATP酶（hydrogen/potassium ATPase）或胃質(zhì)子泵（gastric proton pump）等。

產(chǎn)品內(nèi)容

保存方式

保存反應液（Reagent B）在－20℃冰箱里，避免反復凍融，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

用戶自備

蘇木素復染試劑盒：用于常規(guī)染色后復染

培養(yǎng)箱：用于反應孵育

光學顯微鏡：用于染色后觀察分析

實驗步驟

實驗開始前，將試劑盒里的反應液（Reagent B）從－20℃的冰箱里取出，放進冰槽里融化，避免光照。然后進行下列操作：

操作一、25cm²細胞培養(yǎng)瓶染色

• 樣本激活處理

• 小心抽去25cm²細胞培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)液
• 小心加入xx毫升堿性液（Reagent A）鋪滿整個樣品表面
• 小心抽去堿性液（Reagent A）
• 小心加入x毫升反應液（Reagent B），鋪滿整個樣品表面
• 放進37℃培養(yǎng)箱里，孵育30分鐘
• 小心抽去反應液（Reagent B）
• 小心加入xx毫升激活液（Reagent C），鋪滿整個樣品表面
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去 激活液（Reagent C）
• 重復實驗步驟7至9二次

二、樣本染色處理

• 小心加入xx毫升置換液（Reagent D），鋪滿整個樣品表面
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去置換液（Reagent D）
• 小心加入xx毫升清理液（Reagent E）
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去清理液（Reagent E）
• 小心加入xx毫升顯色液（Reagent F），鋪滿整個樣品表面
• 室溫下孵育30至60秒；或直至可見棕黑色
• 小心抽去顯色液（Reagent F）
• 小心加入xx毫升清理液（Reagent E）
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去清理液（Reagent E）

• （選擇步驟）樣本復染處理

• 樣本復染處理（蘇木素）
• 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：酶活性陽性部位呈現(xiàn)深淺不一的棕黑色（如果復染，則細胞核為藍色）

操作二、24孔細胞培養(yǎng)板染色

• 樣本激活處理

• 小心抽去24孔細胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液
• 小心加入xx微升堿性液（Reagent A），鋪滿整個樣品表面
• 小心抽去堿性液（Reagent A）
• 小心加入xx微升反應液（Reagent B），鋪滿整個樣品表面
• 放進37℃培養(yǎng)箱里，孵育30分鐘
• 小心抽去反應液（Reagent B）
• 小心加入xx微升激活液（Reagent C），鋪滿整個樣品表面
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去激活液（Reagent C）
• 重復實驗步驟7至9二次

二、樣本染色處理

• 小心加入xx微升置換液（Reagent D），鋪滿整個樣品表面
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去置換液（Reagent D）
• 小心加入xx微升清理液（Reagent E）
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去清理液（Reagent E）
• 小心加入xx微升顯色液（Reagent F），鋪滿整個樣品表面
• 室溫下孵育30至60秒；或直至可見棕黑色
• 小心抽去顯色液（Reagent F）
• 小心加入xx微升清理液（Reagent E）
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去清理液（Reagent E）

• （選擇步驟）樣本復染處理

• 樣本復染處理（蘇木素）
• 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：酶活性陽性部位呈現(xiàn)深淺不一的棕黑色（如果復染，則細胞核為藍色）

注意事項

• 本產(chǎn)品為50次（2個24孔板）或10次（10個25cm²細胞培養(yǎng)瓶）操作
• 操作時，須帶手套
• 每次更換試劑溶液時，須抽干殘留液體
• 整個操作，在避光狀態(tài)下進行
• 細胞染色注意不要過度
• 避免使用有機溶劑（乙醇、二甲苯等）脫水、澄清處理
• 細胞染色完成后，即刻進行光學顯微鏡觀察
• 本產(chǎn)品適合各種規(guī)格的培養(yǎng)細胞：載玻片，載玻片培養(yǎng)皿，35mm培養(yǎng)皿，和各種培養(yǎng)孔板，須相應調(diào)整試劑溶液：

• 本公司提供系列組織細胞酶活性染色試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標準

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰