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上海宸功生物技術(shù)有限公司
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細胞三磷酸腺苷酶活性染色試劑盒

時間:2017/1/18閱讀:1220
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細胞三磷酸腺苷酶活性染色試劑盒

產(chǎn)品說明書(中文版)

 

主要用途

 

細胞三磷酸腺苷酶(ATP酶)活性染色試劑是一種旨在使鈣激活技術(shù),在堿性條件下,由三磷酸腺苷酶催化水解產(chǎn)生的磷酸與鈣離子結(jié)合,經(jīng)過氯化鈷的替換,zui后在硫化銨存在的情況下,呈現(xiàn)細胞樣本中酶活性部位的棕黑色沉淀現(xiàn)象的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良、成功實驗證明的。主要適用于各種動物和人體細胞ATP酶的活性檢測。產(chǎn)品嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,靈敏牢固,顯色清晰。

 

技術(shù)背景

三磷酸腺苷酶或ATP酶(adenosinetriphosphatase;ATPase)可催化ATP水解生成ADP及無機磷的反應,這一反應放出大量能量,用于運送離子進出細胞,同時供給生物體進行需能生命過程。它存在于生物細胞的多個部位,比如細胞質(zhì)膜上葉綠體類囊體膜上,對整個生命的維持有著重要的作用。膜結(jié)合ATP酶存在多種形式:鈉鉀ATP酶、胞膜鈣泵ATP酶(plasma membrane calcium ATPase;PMCA)或肌質(zhì)網(wǎng)/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣泵ATP酶(sarcoplasmic or endoplasmic reticulum calcium ATPases;SERCA)、氫鉀ATP酶(hydrogen/potassium ATPase)或胃質(zhì)子泵(gastric proton pump)等。

產(chǎn)品內(nèi)容

 

堿性液(Reagent A)

毫升

反應液(Reagent B)

毫升

激活液(Reagent C)

毫升

置換液(Reagent D)

毫升

清理液(Reagent E)

毫升

顯色液(Reagent F)

毫升

產(chǎn)品說明書

 1份

 

保存方式

 

保存反應液(Reagent B)在-20℃冰箱里,避免反復凍融,避免光照;其余的保存在4℃冰箱里,有效保證6

 

用戶自備

 

蘇木素復染試劑盒:用于常規(guī)染色后復染

培養(yǎng)箱:用于反應孵育

光學顯微鏡:用于染色后觀察分析

 

 

 

實驗步驟

 

實驗開始前,將試劑盒里的反應液(Reagent B從-20的冰箱里取出,放進冰槽里融化,避免光照。然后進行下列操作:

 

操作一、25cm2細胞培養(yǎng)瓶染色

 

  • 樣本激活處理

 

  • 小心抽去25cm2細胞培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)液
  • 小心加xx毫堿性液(Reagent A鋪滿整個樣品表面
  • 小心抽去堿性液(Reagent A
  • 小心加x毫反應液(Reagent B,鋪滿整個樣品表面
  • 放進37℃培養(yǎng)箱里,孵育30分鐘
  • 小心反應液(Reagent B
  • 小心加xx毫激活液(Reagent C),鋪滿整個樣品表面
  • 室溫下孵育2分鐘
  • 小心 激活液(Reagent C
  • 重復實驗步驟79二次

二、樣本染色處理

  • 小心加xx毫置換液(Reagent D,鋪滿整個樣品表面
  • 室溫下孵育2分鐘
  • 小心置換液(Reagent D
  • 小心xx毫升清理液(Reagent E
  • 室溫下孵育2分鐘
  • 小心清理液(Reagent E
  • 小心加入xx毫顯色液(Reagent F,鋪滿整個樣品表面
  • 室溫下孵育3060秒;或直至可見棕黑色
  • 小心顯色液(Reagent F
  • 小心xx毫升清理液(Reagent E
  • 室溫下孵育2分鐘
  • 小心清理液(Reagent E

 

  • (選擇步驟)樣本復染處理

 

  • 樣本復染處理(蘇木素)
  • 即刻在一般光學顯微鏡下觀察:酶活性陽性部位呈現(xiàn)深淺不一的棕黑色(如果復染,則細胞核為藍色)

 

 

 

 

操作二、24孔細胞培養(yǎng)板染色

 

  • 樣本激活處理

 

  • 小心抽去24孔細胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液
  • 小心加xx微升堿性液(Reagent A,鋪滿整個樣品表面
  • 小心堿性液(Reagent A
  • 小心加xx微升反應液(Reagent B,鋪滿整個樣品表面
  • 放進37℃培養(yǎng)箱里,孵育30分鐘
  • 小心反應液(Reagent B
  • 小心加xx微升激活液(Reagent C),鋪滿整個樣品表面
  • 室溫下孵育2分鐘
  • 小心激活液(Reagent C
  • 重復實驗步驟79二次

二、樣本染色處理

  • 小心加xx微升置換液(Reagent D,鋪滿整個樣品表面
  • 室溫下孵育2分鐘
  • 小心置換液(Reagent D
  • 小心xx微清理液(Reagent E
  • 室溫下孵育2分鐘
  • 小心清理液(Reagent E
  • 小心加xx微升顯色液(Reagent F,鋪滿整個樣品表面
  • 室溫下孵育3060秒;或直至可見棕黑色
  • 小心顯色液(Reagent F
  • 小心xx微清理液(Reagent E
  • 室溫下孵育2分鐘
  • 小心清理液(Reagent E

 

  • (選擇步驟)樣本復染處理

 

  • 樣本復染處理(蘇木素)
  • 即刻在一般光學顯微鏡下觀察:酶活性陽性部位呈現(xiàn)深淺不一的棕黑色(如果復染,則細胞核為藍色)

 

注意事項

 

  • 本產(chǎn)品為50次(2個24孔板)或10次(10個25cm2細胞培養(yǎng)瓶)操作
  • 操作時,須帶手套
  • 每次更換試劑溶液時,須抽干殘留液體
  • 整個操作,在避光狀態(tài)下進行
  • 細胞染色注意不要過度
  • 避免使用有機溶劑(乙醇、二甲苯等)脫水、澄清處理
  • 細胞染色完成后,即刻進行光學顯微鏡觀察
  • 本產(chǎn)品適合各種規(guī)格的培養(yǎng)細胞:載玻片,載玻片培養(yǎng)皿,35mm培養(yǎng)皿,和各種培養(yǎng)孔板,須相應調(diào)整試劑溶液:

 

操作容器

建議試劑溶液規(guī)格

載玻片

100微升

載玻片培養(yǎng)皿

1毫升

35mm培養(yǎng)皿

1毫升

96孔培養(yǎng)板

100微升

48孔培養(yǎng)板

200微升

24孔培養(yǎng)板

500微升

12孔培養(yǎng)板

1毫升

6孔培養(yǎng)板

2毫升

25cm2細胞培養(yǎng)瓶

3毫升

 

  • 本公司提供系列組織細胞酶活性染色試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標準

 

  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰

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