冰凍切片組織三磷酸腺苷酶活性染色試劑盒

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
主要用途
冰凍切片組織三磷酸腺苷酶（ATP酶）活性染色試劑是一種旨在使用鈣激活技術(shù)，在堿性條件下，由三磷酸腺苷酶催化水解產(chǎn)生的磷酸與鈣離子結(jié)合，經(jīng)過(guò)氯化鈷的替換，zui后在硫化銨存在的情況下，呈現(xiàn)組織樣本中酶活性部位的棕黑色沉淀現(xiàn)象的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心改良、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于動(dòng)物組織冰凍切片的酶活性檢測(cè)。也可用于人體肌肉組織纖維的分型鑒定。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，靈敏牢固，顯色清晰。
技術(shù)背景
三磷酸腺苷酶或ATP酶（adenosinetriphosphatase；ATPase）可催化ATP水解生成ADP及無(wú)機(jī)磷的反應(yīng)，這一反應(yīng)放出大量能量，用于運(yùn)送離子進(jìn)出細(xì)胞，同時(shí)供給生物體進(jìn)行需能生命過(guò)程。它存在于生物細(xì)胞的多個(gè)部位，比如細(xì)胞質(zhì)膜上和葉綠體類(lèi)囊體膜上等，對(duì)整個(gè)生命的維持有著重要的作用。膜結(jié)合ATP酶存在多種形式：鈉鉀ATP酶、胞膜鈣泵ATP酶（plasma membrane calcium ATPase；PMCA）或肌質(zhì)網(wǎng)/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣泵ATP酶（sarcoplasmic or endoplasmic reticulum calcium ATPases；SERCA）、氫鉀ATP酶（hydrogen/potassium ATPase）或胃質(zhì)子泵（gastric proton pump）等。
產(chǎn)品內(nèi)容
堿性液（Reagent A） 毫升
反應(yīng)液（Reagent B） 毫升
激活液（Reagent C） 毫升
置換液（Reagent D） 毫升
清理液（Reagent E） 毫升
顯色液（Reagent F） 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份
保存方式
保存反應(yīng)液（Reagent B）在－20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月
用戶自備
培養(yǎng)箱：用于反應(yīng)孵育
小型染色缸：用于染色清洗操作
光學(xué)顯微鏡：用于染色后觀察分析
1
或
酶法冰凍切片人體肌肉組織分型染色試劑盒
酶法冰凍切片動(dòng)物肌肉組織分型染色試劑盒
實(shí)驗(yàn)步驟
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將試劑盒里的反應(yīng)液（Reagent B）從－20℃的冰箱里取出，放進(jìn)冰槽里融化，避免光照。然后進(jìn)行下列操作： 一、 樣本激活處理
1．
取出待測(cè)的 5 至 10 微米厚的冰凍組織切片（注意：參見(jiàn)注意事項(xiàng) 3 和 4）
2．
小心加上 xx 微升 堿性液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個(gè)樣品表面 3．
小心移去 堿性液（Reagent A）
4．
小心加上 xx 微升 反應(yīng)液（Reagent B），鋪滿整個(gè)樣品表面 5．
放進(jìn) 37℃培養(yǎng)箱里，孵育 30 分鐘
6．
小心移去 反應(yīng)液（Reagent B）
7．
小心加上 xx 微升 激活液（Reagent C），鋪滿整個(gè)樣品表面 8．
室溫下孵育 2 分鐘
9．
小心移去
激活液（Reagent C）
10．重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟 7 至 9 二次
二、樣本染色處理
1． 小心加上x(chóng)x微升置換液（Reagent D），鋪滿整個(gè)樣品表面
2． 室溫下孵育2分鐘
3． 小心移去置換液（Reagent D）
4． 室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent E）中孵育1分鐘
5． 小心移去切片上的清理液（Reagent E）
6． 小心加上x(chóng)x微升顯色液（Reagent F），鋪滿整個(gè)樣品表面
7． 室溫下孵育30至60秒；或直至可見(jiàn)棕黑色
8． 小心移去顯色液（Reagent F）
9． 室溫下，小心將切片置入xx毫升清理液（Reagent E）中孵育2分鐘
10．小心移去切片上的清理液（Reagent E）
三、 （選擇步驟）樣本復(fù)染處理
1． 樣本復(fù)染處理（蘇木素）
2． 放上蓋玻片或封片
3． 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：酶活性陽(yáng)性部位呈現(xiàn)深淺不一的棕黑色（如果復(fù)染，則細(xì)胞核為藍(lán)色）
注意事項(xiàng)
1． 本產(chǎn)品為50次操作
2． 操作時(shí)，須帶手套
3． 建議組織快速冷凍，避免切片冰晶形成
4． 冰凍切片不可固定處理
5． 試劑溶液在樣品表面時(shí)，避免有氣泡存在，同時(shí)確保鋪滿樣品表面
6． 本產(chǎn)品可以用于鑒定人體肌肉纖維I型和II型：淺染為I型；深染為II型。如果需要進(jìn)一步鑒定亞型
或動(dòng)物肌肉纖維分型，建議使用
7． 組織細(xì)胞染色注意不要過(guò)度
8． 可以使用有機(jī)溶劑（乙醇、二甲苯等）脫水、澄清處理后封片
9． 組織細(xì)胞染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察
10．本公司提供系列組織細(xì)胞酶活性染色試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰