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上海宸功生物技術(shù)有限公司
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全組織三磷酸腺苷酶活性染色試劑盒

時間:2017/1/18閱讀:1197
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全組織三磷酸腺苷酶活性染色試劑盒

產(chǎn)品說明書

 

主要用途

 

全組織三磷酸腺苷酶(ATP酶)活性染色試劑是一種旨在使鈣激活技術(shù),在堿性條件下,由三磷酸腺苷酶催化水解產(chǎn)生的磷酸與鈣離子結(jié)合,經(jīng)過氯化鈷的替換,zui后在硫化銨存在的情況下,呈現(xiàn)組織樣本中酶活性部位的棕黑色沉淀現(xiàn)象的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于各種動物組織的酶活性檢測。也可用于人體肌肉組織纖維的分型鑒定。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,靈敏牢固,顯色清晰。

 

技術(shù)背景

三磷酸腺苷酶或ATP酶(adenosinetriphosphatase;ATPase)可催化ATP水解生成ADP及無機(jī)磷的反應(yīng),這一反應(yīng)放出大量能量,用于運(yùn)送離子進(jìn)出細(xì)胞,同時供給生物體進(jìn)行需能生命過程。它存在于生物細(xì)胞的多個部位,比如細(xì)胞質(zhì)膜上葉綠體類囊體膜上,對整個生命的維持有著重要的作用。膜結(jié)合ATP酶存在多種形式:鈉鉀ATP酶、胞膜鈣泵ATP酶(plasma membrane calcium ATPase;PMCA)或肌質(zhì)網(wǎng)/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣泵ATP酶(sarcoplasmic or endoplasmic reticulum calcium ATPases;SERCA)、氫鉀ATP酶(hydrogen/potassium ATPase)或胃質(zhì)子泵(gastric proton pump)等。

產(chǎn)品內(nèi)容

 

堿性液(Reagent A)

毫升

反應(yīng)液(Reagent B)

毫升

激活液(Reagent C)

毫升

置換液(Reagent D)

毫升

清理液(Reagent E)

毫升

顯色液(Reagent F)

毫升

產(chǎn)品說明書

1份

 

保存方式

 

保存反應(yīng)液(Reagent B)在-20℃冰箱里,避免反復(fù)凍融,避免光照;其余的保存在4℃冰箱里,有效保證6

 

用戶自備

 

培養(yǎng)箱:用于反應(yīng)孵育

光學(xué)顯微鏡:用于染色后觀察分析

 

 

 

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

實(shí)驗(yàn)開始前,將試劑盒里的反應(yīng)液(Reagent B從-20的冰箱里取出,放進(jìn)冰槽里融化,避免光照。然后進(jìn)行下列操作:

  • 樣本激活處理

 

  • 準(zhǔn)備16孔細(xì)胞培養(yǎng)板
  • 放進(jìn)新鮮切除的動物組織樣本(注意:建議組織大小為0.5厘米厚,1厘米長;如果過大,刀切處理一下)
  • 將組織壓平
  • 小心加入xx毫升堿性液(Reagent A,浸沒整個組織
  • 小心堿性液(Reagent A
  • 小心加入xx毫升反應(yīng)液(Reagent B,浸沒整個組織
  • 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里,孵育30分鐘
  • 小心反應(yīng)液(Reagent B
  • 小心加入xx毫升激活液(Reagent C),浸沒整個組織
  • 室溫下孵育2分鐘
  • 小心激活液(Reagent C
  • 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟911二次

二、樣本染色處理

  • 小心加入xx毫升置換液(Reagent D,浸沒整個組織
  • 室溫下孵育2分鐘
  • 小心置換液(Reagent D
  • 小心加入xx毫升清理液(Reagent E,浸沒整個組織
  • 室溫下孵育1分鐘
  • 小心抽去清理液(Reagent E
  • 小心加入xx毫升顯色液(Reagent F,浸沒整個組織
  • 室溫下孵育3060秒;或直至可見棕黑色
  • 小心顯色液(Reagent F
  • 小心加入xx毫升清理液(Reagent E,浸沒整個組織
  • 室溫下孵育2分鐘
  • 小心抽去清理液(Reagent E
  • 后續(xù)石蠟切片(6微米厚)或冰凍切片(10微米厚)
  • 在光學(xué)顯微鏡下觀察:酶活性陽性部位呈現(xiàn)深淺不一的棕黑色(如果復(fù)染,則細(xì)胞核為藍(lán)色)

 

注意事項(xiàng)

 

  • 本產(chǎn)品為10次操作
  • 操作時,須帶手套
  • 用戶根據(jù)實(shí)際需求,按比例配制試劑用量
  • 本產(chǎn)品可以用于鑒定人體肌肉纖維I型和II型:淺染為I型;深染為II型。如果需要進(jìn)一步鑒定亞型或動物肌肉纖維分型,建議使用ATP酶法冰凍切片人體肌肉組織分型染色試劑盒ATP酶法冰凍切片動物肌肉組織分型染色試劑
  • 組織染色注意不要過度
  • 色孵育時間,根據(jù)樣品和酶活性強(qiáng)弱調(diào)整,通常為60
  • 全組織染色存在其染色不均勻、組織內(nèi)部染色滲透困難等局限
  • 可以使用有機(jī)溶劑(乙醇、二甲苯等)脫水、澄清等后續(xù)處理
  • 本公司提供系列組織細(xì)胞酶活性染色試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰

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