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石蠟切片紅氨酸(RUBEANIC ACID)銅染色試劑盒

時(shí)間:2017/1/18閱讀:1944
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HL80048.1.2 v.A

 

石蠟切片紅氨酸(RUBEANIC ACID)銅染色試劑盒產(chǎn)品說明書

 

主要用途

 

石蠟切片紅氨酸(RUBEANIC ACID)銅染色試劑是一種旨在使用標(biāo)準(zhǔn)化的化學(xué)脫蠟方法和紅氨酸結(jié)合銅蛋白反應(yīng)技術(shù),分析存檔中的石蠟包埋的組織切片中銅沉積現(xiàn)象的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于石蠟包埋組織切片的銅分子檢測。廣泛用于肝組織病理生理的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,顯色清晰。

 

技術(shù)背景

 

細(xì)胞漿里含有以結(jié)合蛋白形式的銅分子,然而過多銅分子的存在將產(chǎn)生毒性作用,尤其在肝臟組織,導(dǎo)致急性肝炎、晚期肝纖維化和慢性漸進(jìn)性梗阻性黃疸。遺傳性威爾遜氏癥(Wilson’s disease)為典型肝內(nèi)銅增多癥。紅氨酸(rubeanic acid),又稱為二硫代草酰胺(dithiooxamide),分子式為C2H4N2S2,分子量120.19,一種草酰胺硫類似物(sulfur analog)的螫合劑chelating agent),與銅蛋白具有強(qiáng)力親和性。一旦反應(yīng),產(chǎn)生深綠色沉積,以證明銅分子的存在。與羅丹寧染色比較,紅氨酸染色更為穩(wěn)定持久。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

脫蠟液(Reagent A)         毫升

補(bǔ)水液A(Reagent B)  毫升

補(bǔ)水液B(Reagent C)  毫升

補(bǔ)水液C(Reagent D)  毫升

補(bǔ)水液D(Reagent E)  毫升

清理液(Reagent F)  毫升

染色液(Reagent G)  毫升

稀釋液(Reagent H)  毫升

產(chǎn)品說明書  1份

 

保存方式

 

保存在4℃冰箱里,密閉瓶蓋;染色液(Reagent G),避免光照; 有效保證3

 

用戶自備

 

小型染色缸:用于石蠟切片的去石蠟和染色操作

培養(yǎng)箱或烘箱:用于脫蠟或染色孵育操作

光學(xué)顯微鏡:用于組織細(xì)胞染色后觀察分析

 

 

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

  • 脫蠟處理

 

  • 取出10片待測的5微米厚石蠟包埋的組織切片(注意:石蠟包埋前,組織切片須用10%甲醛4℃條件下,固定16小時(shí),此步很重要
  • (選擇步驟)放進(jìn)80℃烘箱,孵育30分鐘
  • (選擇步驟)室溫下靜置15分鐘
  • 按下表依次放進(jìn)小染色缸里孵育

 

染色缸 

孵育時(shí)間 

xx毫升脫蠟液Reagent A 

15分鐘

xx毫升脫蠟液Reagent A

15分鐘

xx毫升脫蠟液Reagent A

15分鐘

xx毫升補(bǔ)水液AReagent B

3分鐘

xx毫升補(bǔ)水液BReagent C

3分鐘

xx毫升補(bǔ)水液CReagent D

3分鐘

xx毫升補(bǔ)水液DReagent E 

3分鐘

 

  • 小心移去切片上的補(bǔ)水液DReagent E
  • 小心加上xx微升清理液(Reagent F在切片上,鋪滿整個(gè)切片樣品表面
  • 室溫下孵育5分鐘
  • 小心移去切片上的清理液(Reagent F 
  • 樣本染色處理

操作開始前,將4℃冰箱里的試劑盒中的染色液(Reagent G置入室溫下預(yù)熱。準(zhǔn)備1個(gè)50毫升小型染色缸,移取xx毫升充分搖勻的染色液(Reagent G到染色缸里,加入xx毫升稀釋液(Reagent H),混勻后靜置,標(biāo)記為染色工作液,避免光照。然后進(jìn)行下列操作。

  • 小心將切片置入xx毫升染色工作液中(注意:確保整個(gè)切片樣品浸泡在工作液里
  • 室溫下孵育24至72小時(shí)
  • 取出切片,小心移去切片上的染色工作液 
  • 小心將切片置入xx毫升補(bǔ)水液BReagent C(注意:確保整個(gè)切片樣品浸泡在補(bǔ)水液里
  • 室溫下孵育3小時(shí)
  • 小心將切片置入xx毫升補(bǔ)水液AReagent B(注意:確保整個(gè)切片樣品浸泡在補(bǔ)水液里
  • 室溫下孵育3至24小時(shí)
  • 取出切片,小心移去切片上的補(bǔ)水AReagent B
  • 放上蓋玻片或封片
  • 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察:銅沉積陽性細(xì)胞呈現(xiàn)深綠色(24小時(shí)孵育)黑色(72小時(shí)孵育)

 

注意事項(xiàng)

 

  • 本產(chǎn)品為50次操作
  • 操作時(shí),須戴手套
  • 試劑具有揮發(fā)性,注意用后密閉瓶蓋
  • 石蠟包埋前,組織切片須用10%甲醛4條件下,固定16小時(shí),否則造成樣品支離破碎
  • 染色液(Reagent G)具有不溶性顆粒,使用前,須搖勻,使顆粒均勻分布在溶液里
  • 染色工作液不宜久放
  • 正常肝或脾臟組織含有大量銅,可以作為陽性對照
  • 可以使用蘇木素復(fù)染試劑盒(HL80067)
  • 染色完成后,即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察 
  • 本公司提供系列組織細(xì)胞金屬元素染色試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰

 

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