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上海宸功生物技術有限公司
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細胞中性脂質油紅O染色試劑盒

時間:2017/1/18閱讀:1568
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細胞中性脂質油紅O染色試劑盒

產品說明書

 

主要用途

 

細胞中性脂質油紅O染色試劑是一種旨在使用高度脂溶性偶氮染料油性紅O染色技術,特異性地使細胞內中性甘油三脂、脂質以及脂蛋白顯示紅色,以分析細胞樣品中脂質狀況的而經典的技術方法。該技術由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種人體和動物細胞樣本。用于成脂細胞定性、細胞病理學分析(脂質細胞瘤;LIPOID)和識別(脂肪肉瘤;liposarcoma等研究。產品即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,著色清晰。 

 

技術背景

 

脂類物質(LIPIDS)是一類脂溶性(疏水性)的自然分子,包括脂肪酸(FATTY ACID)及其衍生物甘油一脂、二脂、三脂和磷脂,以及其它固醇類(STEROL)物質,例如膽固醇。脂類物質在機體中具有能量儲存的作用,是膜結構的組成成分和細胞信號分子。油性紅O(Oil Red O),又稱為27號紅色溶劑(Solvent Red 27)或蘇丹紅5B(Sudan Red 5B),是一種脂溶性偶氮染料(LYSOCHROME AZO DYE)。其分子式為C26H24N4O,分子量為408.51。染色顯示細胞脂類物質呈紅色。

 

產品內容

 

清理液(Reagent A)  毫升

固著液(Reagent B)  毫升

脫水液(Reagent C)  毫升

染色液(Reagent D)  毫升

澄清液(Reagent E)  毫升

產品說明書       1份

 

保存方式

 

保存在4℃冰箱里;染色液(Reagent D),避免光照;有效保證6月

 

用戶自備

 

蘇木素復染試劑盒:用于常規(guī)染色后復染

經典水相封片液:用于染色后封片處理

小型染色缸:用于細胞染色操作

溫箱:用于試劑預熱或保存

光學顯微鏡:用于組織細胞染色后觀察分析

 

 

 

 

實驗步驟

 

實驗開始前,將染色液(Reagent D置于60溫箱里預熱,避免光照。然后進行下列操作。

 

操作一:細胞載玻片染色

  • 樣本固著處理

 

  • 取出待測的細胞載玻片  
  • 小心加上xx微升清理液(Reagent A在載玻片上,鋪滿整個樣品表面
  • 小心移去載玻片上的清理液(Reagent A
  • 小心加上xx微升固著液(Reagent B,鋪滿整個樣品表面
  • 室溫下,孵育10分鐘
  • 小心移去載玻片上的固著液(Reagent B
  • 小心加上xx微升清理液(Reagent A),清洗樣品表面
  • 小心移去載玻片上的清理液(Reagent A
  • 重復實驗步驟78一次

二、樣本染色處理

  • 小心加上xx微升脫水液(Reagent C在載玻片上,鋪滿整個載玻片樣品表面
  • 室溫下靜置5分鐘
  • 小心移去載玻片上的脫水液(Reagent C
  • 重復實驗步驟13一次
  • 小心加上xx微升染色液(Reagent D,鋪滿整個載玻片樣品表面
  • 室溫下靜置7分鐘;或直至可見紅色
  • 小心移去載玻片上的染色液(Reagent D 
  • 室溫下,小心將載玻片置入xx毫升清理液(Reagent A中孵育2分鐘
  • 輕輕移去載玻片上的清理液(Reagent A 

 

三、 樣本復染處理

 

  • 小心加上xx微升澄清液(Reagent E在載玻片上,鋪滿整個載玻片樣品表面
  • 室溫下孵育3分鐘
  • 小心移去載玻片上的澄清液(Reagent E
  • 室溫下,小心將載玻片置入xx毫升清理液(Reagent A中孵育2分鐘
  • 小心移去載玻片上的清理液(Reagent A 
  • (選擇步驟)樣本復染處理(蘇木素)
  • 放上蓋玻片或水相封片
  • 即刻在一般光學顯微鏡下觀察

 

 

操作二:24孔細胞培養(yǎng)板染色

一、樣本固著處理

 

1小心抽去24孔細胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液

2.每孔加入xx微升清理液(Reagent A,清洗生長中的細胞表面

3.小心抽去每孔里的清理液(Reagent A

4.每孔加入xx微升固著液(Reagent B,覆蓋整個生長表面

5.在室溫下孵育10分鐘

6.小心抽去固著液(Reagent B

7.每孔加入xx微升清理液(Reagent A,清洗細胞表面

8.小心抽去清理液(Reagent A

9.重復實驗步驟78二次

二、樣本染色處理

  • 小心加上xx微升脫水液(Reagent C,覆蓋整個生長表面
  • 室溫下靜置5分鐘
  • 小心抽去脫水液(Reagent C
  • 重復實驗步驟13一次
  • 小心加上xx微升染色液(Reagent D,覆蓋整個生長表面
  • 室溫下靜置7分鐘;或直至可見紅色
  • 小心抽去染色液(Reagent D
  • 室溫下,小心加入xx微升清理液(Reagent A
  • 室溫下孵育2分鐘
  • 小心抽去清理液(Reagent A

 

三、 樣本復染處理

 

  • 小心加上xx微升平衡液(Reagent E),覆蓋整個生長表面
  • 室溫下孵育5分鐘
  • 小心抽去平衡液(Reagent E
  • 小心加入xx微升清理液(Reagent A
  • 室溫下孵育2分鐘
  • 小心抽去清理液(Reagent A
  • 樣本復染處理(蘇木素)
  • 即刻在一般光學顯微鏡下觀察

注意事項

 

  • 本產品為20次(細胞載玻片)操作
  • 操作時,須戴手套
  • 所有操作在室溫下進行
  • 每次更換試劑溶液時,保持細胞表面基本晾干。空氣中晾干狀態(tài)為沒有水滴,呈濕潤狀態(tài),可見反光
  • 試劑溶液在樣品表面時,避免有氣泡存在,同時確保鋪滿細胞表面
  • 樣品染色避免過度,肉眼可見紅色即可終止染色
  • 建議使用蘇木素復染試劑盒,增加染色對比度
  • 細胞染色完成后,即刻進行光學顯微鏡觀察 
  • 封片處理,避免使用有機溶劑類包括乙醇等,而使用水相封片液;
  • 本公司提供系列脂類染色試劑產品

 

質量標準

 

  • 本產品經鑒定性能穩(wěn)定
  • 本產品經鑒定顯色清晰

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