冰凍切片總膽固醇（酯酶法）菲律賓（FILIPIN）熒光染色試劑盒

產(chǎn)品說(shuō)明書

主要用途

冰凍切片總膽固醇（酯酶法）菲律賓（FILIPIN）熒光染色試劑是一種旨在通過(guò)使用膽固醇酯酶和熒光染料菲律賓（FILIPIN）特異性與游離膽固醇結(jié)合，形成復(fù)合體，并產(chǎn)生藍(lán)色熒光現(xiàn)象，以此檢測(cè)總膽固醇的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心改良、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于冰凍切片組織總膽固醇的檢測(cè)。廣泛用于組織病理生理的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，熒光清晰。

技術(shù)背景

膽固醇（cholesterol）是一類稱之為固醇類（sterols）或聚類異戊二烯（polyisoprenoid）或三萜皂甙元（triterpene）的多環(huán)化合物（polycyclic compound）。其分子式為cholest-5-en-3β-ol。膽固醇以游離（free form）和脂化結(jié)合（ester）兩種形式廣泛存在于所有動(dòng)物組織中，主要以非脂化形式存在于細(xì)胞膜中。在膜功能和脂代謝以及激素合成中起著重要作用。菲律賓（FILIPIN）是一類由四種同分異構(gòu)體的多烯抗生素（polyene antibiotics）或多馬霉素（polyene macrolide）的總稱。源自于S. FILIPINENSIS細(xì)菌的培養(yǎng)液中。其分子式為C35H58O11，分子量為654.8。首先在膽固醇酯酶（cholesterol esterase）的水解下，酯化膽固醇（cholesterel ester）轉(zhuǎn)化為游離膽固醇，然后使用菲律賓與所有游離膽固醇結(jié)合形成聚集體或復(fù)合物，產(chǎn)生熒光。

產(chǎn)品內(nèi)容

保存方式

保存水解液（Reagent C）和染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月

用戶自備

熒光顯微鏡：用于樣品染色后觀察分析

實(shí)驗(yàn)步驟

• 樣本固著處理

• 取出待測(cè)的5至10微米厚的冰凍切片（注意：使用快速冷凍處理－snap frozen的冰凍切片，不宜使用包埋處理）  
• 小心加上xx微升清理液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個(gè)樣品表面
• 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟2至3二次
• 小心加上xx微升固著液（Reagent B），鋪滿整個(gè)樣品表面
• 室溫下孵育30分鐘
• 小心移去切片上的固著液（Reagent B）
• 小心加上xx微升清理液（Reagent A），清洗樣品表面
• 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟8至9二次

二、樣本染色處理

• 小心加上xx微升水解液（Reagent C）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育1小時(shí)（注意：可以延長(zhǎng)至4小時(shí)，避免干枯）
• 小心移去切片上的水解液（Reagent C）
• 小心加上xx微升清理液（Reagent A），清洗樣品表面
• 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟4至5一次
• 小心加上xx微升抗干擾液（Reagent D），鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育10分鐘
• 小心移去切片上的抗干擾液（Reagent D）
• 小心加上xx微升染色液（Reagent E），鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育30分鐘，避免光照
• 小心移去切片上的染色液（Reagent E）
• 小心加上xx微升清理液（Reagent A），清洗樣品表面
• 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟13至14二次
• 即刻放上蓋玻片或封片
• 在熒光顯微鏡下觀察：激發(fā)波長(zhǎng)：340nm；散發(fā)波長(zhǎng)：430nm――膽固醇陽(yáng)性呈現(xiàn)藍(lán)色熒光

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為50次操作
• 操作時(shí)，須戴手套
• 操作時(shí)，避免污染母液
• 試劑溶液在樣品表面時(shí)，避免有氣泡存在，同時(shí)確保鋪滿樣品表面
• 樣品染色完成后，即刻進(jìn)行熒光顯微鏡觀察 
• 熒光容易受到光漂白（photobleach）
• 本產(chǎn)品染色后，可用于電鏡分析
• 本公司提供系列組織細(xì)胞生物化學(xué)成分染色試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰

產(chǎn)品說(shuō)明書

（中文版）

主要用途

冰凍切片總膽固醇（酯酶法）菲律賓（FILIPIN）熒光染色試劑是一種旨在通過(guò)使用膽固醇酯酶和熒光染料菲律賓（FILIPIN）特異性與游離膽固醇結(jié)合，形成復(fù)合體，并產(chǎn)生藍(lán)色熒光現(xiàn)象，以此檢測(cè)總膽固醇的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心改良、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于冰凍切片組織總膽固醇的檢測(cè)。廣泛用于組織病理生理的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，熒光清晰。

技術(shù)背景

膽固醇（cholesterol）是一類稱之為固醇類（sterols）或聚類異戊二烯（polyisoprenoid）或三萜皂甙元（triterpene）的多環(huán)化合物（polycyclic compound）。其分子式為cholest-5-en-3β-ol。膽固醇以游離（free form）和脂化結(jié)合（ester）兩種形式廣泛存在于所有動(dòng)物組織中，主要以非脂化形式存在于細(xì)胞膜中。在膜功能和脂代謝以及激素合成中起著重要作用。菲律賓（FILIPIN）是一類由四種同分異構(gòu)體的多烯抗生素（polyene antibiotics）或多馬霉素（polyene macrolide）的總稱。源自于S. FILIPINENSIS細(xì)菌的培養(yǎng)液中。其分子式為C35H58O11，分子量為654.8。首先在膽固醇酯酶（cholesterol esterase）的水解下，酯化膽固醇（cholesterel ester）轉(zhuǎn)化為游離膽固醇，然后使用菲律賓與所有游離膽固醇結(jié)合形成聚集體或復(fù)合物，產(chǎn)生熒光。

產(chǎn)品內(nèi)容

保存方式

保存水解液（Reagent C）和染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月

用戶自備

熒光顯微鏡：用于樣品染色后觀察分析

實(shí)驗(yàn)步驟

• 樣本固著處理

• 取出待測(cè)的5至10微米厚的冰凍切片（注意：使用快速冷凍處理－snap frozen的冰凍切片，不宜使用包埋處理）  
• 小心加上xx微升清理液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個(gè)樣品表面
• 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟2至3二次
• 小心加上xx微升固著液（Reagent B），鋪滿整個(gè)樣品表面
• 室溫下孵育30分鐘
• 小心移去切片上的固著液（Reagent B）
• 小心加上xx微升清理液（Reagent A），清洗樣品表面
• 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟8至9二次

二、樣本染色處理

• 小心加上xx微升水解液（Reagent C）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育1小時(shí)（注意：可以延長(zhǎng)至4小時(shí)，避免干枯）
• 小心移去切片上的水解液（Reagent C）
• 小心加上xx微升清理液（Reagent A），清洗樣品表面
• 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟4至5一次
• 小心加上xx微升抗干擾液（Reagent D），鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育10分鐘
• 小心移去切片上的抗干擾液（Reagent D）
• 小心加上xx微升染色液（Reagent E），鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育30分鐘，避免光照
• 小心移去切片上的染色液（Reagent E）
• 小心加上xx微升清理液（Reagent A），清洗樣品表面
• 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟13至14二次
• 即刻放上蓋玻片或封片
• 在熒光顯微鏡下觀察：激發(fā)波長(zhǎng)：340nm；散發(fā)波長(zhǎng)：430nm――膽固醇陽(yáng)性呈現(xiàn)藍(lán)色熒光

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為50次操作
• 操作時(shí)，須戴手套
• 操作時(shí)，避免污染母液
• 試劑溶液在樣品表面時(shí)，避免有氣泡存在，同時(shí)確保鋪滿樣品表面
• 樣品染色完成后，即刻進(jìn)行熒光顯微鏡觀察 
• 熒光容易受到光漂白（photobleach）
• 本產(chǎn)品染色后，可用于電鏡分析
• 本公司提供系列組織細(xì)胞生物化學(xué)成分染色試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰