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細菌銅型亞硝酸鹽還原酶活性比色法定量檢測試劑盒
產(chǎn)品說明書
主要用途
細菌銅型亞硝酸鹽還原酶活性比色法定量檢測試劑是一種旨在通過底物亞硝酸鹽,在鐵型抑制劑的存在下,被催化產(chǎn)生氨或一氧化氮的同時,人工電子供體還原型甲基紫精氧化后呈現(xiàn)吸光峰值的變化,即采用比色法來測定樣品中銅型亞硝酸鹽還原酶特異活性的而經(jīng)典的技術方法。該技術經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細菌細胞裂解懸液樣品的銅型亞硝酸鹽還原酶的特異活性檢測。產(chǎn)品嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,重復性好。
技術背景
亞硝酸鹽還原酶(nitrite reductase;NiR)是一類催化亞硝酸鹽為氨或一氧化氮的還原反應的酶,其分成同化型(assimilatory)和異化型(dissimilatory)亞硝酸還原酶,在生物氮循環(huán)進行厭氧能量代謝中起著重要作用。同化型酶以鐵氧還原蛋白、FAD、非血紅素鐵、西羅血紅素(siroheme)、NAD(P)H等為電子供體,進行6個電子的還原產(chǎn)生氨(ammonification),包括高等植物、綠藻及藍藻、粗糙脈孢菌(Neur-ospora crassa)、和大腸埃希氏菌(Escherichia coli)等。異化型酶參與使用亞硝酸氧化有機物質(zhì)的過程,包括單電子反應生成NO和6個電子的還原產(chǎn)生氨。其脫氮作用(denitrification)是細菌或真菌等獲得能量、適應環(huán)境生存的生理過程。脫氮細菌、真菌或植物的亞硝酸還原酶有二種:銅型和鐵型。銅型(CuNiR)含有類似于銅藍蛋白(azurin)的銅中心部位,含有2個銅原子,銅藍蛋白為電子供體;鐵型(ccNiR)含有同源雙體,分別62Kd,包括c型和d1型細胞色素結構域,細胞色素C為電子供體。銅型和鐵型的生理反應相同,但同一細菌互不共有(mutual exclusive)。銅型(EC1.7.2.1),由基因nrfK編碼,主要在無色菌(achromobacter)、沼澤紅假單胞桿菌(rhodopseudomonas)、某種產(chǎn)堿桿菌(alcaligenes)等細菌周質(zhì)(periplasmic)中存在。基于底物亞硝酸鹽(KNO2),在鐵型抑制劑聯(lián)吡啶(dipyridil)和EDTA以及人工電子供體還原型甲基紫精(methyl viologen)的參與下,受到亞硝酸鹽還原酶的催化產(chǎn)生氨或一氧化氮,同時還原型甲基紫精轉化為氧化型甲基紫精,通過其吸收峰值的變化(600nm波長),來定量分析銅型亞硝酸鹽還原酶的特異活性。其反應方式為:
產(chǎn)品內(nèi)容
裂解液(Reagent A) | 毫升 |
活性液(Reagent B) | 微升 |
緩沖液(Reagent C) | 毫升 |
底物液(Reagent D) | 微升 |
反應液(Reagent E) | 微升 |
還原液(Reagent F) | 管 |
稀釋液(Reagent G) | 毫升 |
陰性液(Reagent H) | 微升 |
專性液(Reagent I) | 微升 |
說明書 | 1份 |
保存方式
保存在-20℃冰箱里,有效保證6月
用戶自備
1.5毫升離心管:用于制備樣品的容器
(微型)臺式離心機:用于樣品處理
恒溫水槽:用于反應孵育
酶標板或比色皿:用于比色的容器
酶標儀或分光光度儀:用于樣品比色分析
實驗步驟
一、樣品準備
檢測開始前,移取xx微升緩沖液(Reagent C)到1.5毫升離心管,分別加入xx微升專性液(Reagent I)和待測樣品(注意:50微克細菌裂解蛋白),混勻后,放進37℃培養(yǎng)箱里孵育15分鐘。然后繼續(xù)下列操作。
(一)樣品活性測定
檢測開始前,移取xx微升緩沖液(Reagent C)到1.5毫升離心管,分別加入xx微升專性液(Reagent I)和待測樣品(注意:50微克細菌裂解蛋白),混勻后,放進37℃培養(yǎng)箱里孵育15分鐘。然后繼續(xù)下列操作。
注意事項
質(zhì)量標準
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