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上海宸功生物技術(shù)有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第10年

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細(xì)菌亞硝酸鹽還原酶定性檢測(cè)試劑盒

時(shí)間:2017/1/18閱讀:1450
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細(xì)菌亞硝酸鹽還原酶定性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

主要用途

 

細(xì)菌亞硝酸鹽還原酶定性檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)底物亞硝酸鹽,在亞硝酸還原酶的催化作用下,產(chǎn)生氨或一氧化氮,進(jìn)而使用使用磺胺酸N,N-二甲基-1-萘胺呈現(xiàn)無(wú)反應(yīng),來(lái)定分析細(xì)菌樣品中亞硝酸鹽還原酶活性而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的其適用于各種細(xì)菌樣品中亞硝酸鹽還原酶活性的定性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,重復(fù)性好。

 

技術(shù)背景

 

亞硝酸鹽還原酶nitrite reductase;NiR)是一類催化亞硝酸鹽還原為氨或一氧化氮的還原反應(yīng)的酶,其分成同化型(assimilatory)和異化型(dissimilatory)亞硝酸還原酶,在生物氮循環(huán)進(jìn)行厭氧能量代謝中起著重要作用。同化型酶以鐵氧還原蛋白、FAD、非血紅素鐵、西羅血紅素(siroheme)、NAD(P)H為電子供體,進(jìn)行6個(gè)電子的還原產(chǎn)生氨(ammonification),包括高等植物、綠藻及藍(lán)藻粗糙脈孢菌(Neur-ospora crassa)、和大腸埃希氏菌(Escherichia coli)等。異化型酶參與使用亞硝酸氧化有機(jī)物質(zhì)的過(guò)程,包括單電子反應(yīng)生成NO6個(gè)電子的還原產(chǎn)生氨。其脫氮作用是細(xì)菌或真菌等獲得能量、適應(yīng)環(huán)境生存的生理過(guò)程。脫氮細(xì)菌、真菌或植物的亞硝酸還原酶有二種:銅型和鐵型。銅型(CuNiR)含有類似于藍(lán)蛋白(azurin)的銅中心部位銅藍(lán)蛋白為電子供體;鐵型(ccNiR)含有同源雙體,包括c型和d1型細(xì)胞色素結(jié)構(gòu)域,細(xì)胞色素C為電子供體。亞硝酸鹽在食品工業(yè)中用于色素、調(diào)味和防止氧化,還用于蔬菜發(fā)酵,但是它具有致畸(tetragenic)和致癌作用(carcinogenic),會(huì)引起高鐵血紅蛋白血癥methemoglobinemia)。基于底物硝酸鹽(nitrite),通過(guò)硝酸鹽還原酶(nitrite reductase;NiR)的催化作用,而還原為氨或一氧化氮,進(jìn)而使用磺胺酸(sulfanilic acid)和N,N-二甲基-1-萘胺(N, N dimethyl-1-naphthylamine),呈現(xiàn)無(wú)色反應(yīng),而對(duì)照顯示紅色,來(lái)定性分析硝酸鹽還原酶的活性。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

培養(yǎng)液(Reagent A) 毫升

反應(yīng)液(Reagent B) 毫升

顯色液(Reagent C) 毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份

 

保存方式

 

保存在4冰箱里;顯色液(Reagent C)避免光照;反應(yīng)液(Reagent B)具有腐蝕性,注意操作安全;有效保證3

 

用戶自備

 

15毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器

恒溫培養(yǎng)箱:用于細(xì)菌培養(yǎng)

 

實(shí)驗(yàn)步驟

   

  • 準(zhǔn)備好2個(gè)15毫升錐形離心管,標(biāo)記為:背景對(duì)照和待測(cè)樣品
  • 分別移取xx毫升培養(yǎng)液(Reagent A)到15毫升錐形離心管
  • 接種用戶自備的待測(cè)細(xì)菌樣品到待測(cè)樣品管
  • 放進(jìn)35培養(yǎng)箱孵育48小時(shí)(注意:少量菌種可以延長(zhǎng)孵育至5天)
  • 加入xx微升反應(yīng)液(Reagent B),混勻
  • 加入xx微升顯色液(Reagent C),混勻
  • 觀察2分鐘
  • 結(jié)果:

 

注意事項(xiàng)

 

  • 本產(chǎn)品為20次操作
  • Veillonellae、Haemophili、Staphylococci、Corynebacteria、Lactobacilli、Flavobacteria、Fusobacteria、Enterobacteriaceae、Neisseria spp、Leuconostoc等亞硝酸還原酶陽(yáng)性
  • 操作時(shí),須戴手套
  • 操作時(shí),嚴(yán)格無(wú)菌,避免污染母液
  • 反應(yīng)液(Reagent B)具有腐蝕性,注意操作安全
  • 樣品中避免含有各種還原性化學(xué)物質(zhì),包括巰基乙醇(2-mercaptoethanol)、二硫蘇糖醇(dithiothreitol;DTT)、維生素C(ascorbic acid)和*(azide
  • 與背景對(duì)照測(cè)定顯示紅色相比,待測(cè)樣品呈現(xiàn)無(wú)色,表明具有酶活性
  • 本公司提供系列亞硝酸鹽還原酶分析試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感

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