細(xì)菌亞硝酸鹽還原酶定性檢測試劑盒

產(chǎn)品說明書

主要用途

細(xì)菌亞硝酸鹽還原酶定性檢測試劑是一種旨在通過底物亞硝酸鹽，在亞硝酸鹽還原酶的催化作用下，產(chǎn)生氨或一氧化氮，進而使用使用磺胺酸和N,N-二甲基-1-萘胺，呈現(xiàn)無色反應(yīng)，來定性分析細(xì)菌樣品中亞硝酸鹽還原酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細(xì)菌樣品中亞硝酸鹽還原酶活性的定性檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，重復(fù)性好。

技術(shù)背景

亞硝酸鹽還原酶（nitrite reductase；NiR）是一類催化亞硝酸鹽還原為氨或一氧化氮的還原反應(yīng)的酶，其分成同化型（assimilatory）和異化型（dissimilatory）亞硝酸還原酶，在生物氮循環(huán)進行厭氧能量代謝中起著重要作用。同化型酶以鐵氧還原蛋白、FAD、非血紅素鐵、西羅血紅素（siroheme）、NAD（P）H等為電子供體，進行6個電子的還原產(chǎn)生氨（ammonification），包括高等植物、綠藻及藍藻、粗糙脈孢菌（Neur-ospora crassa）、和大腸埃希氏菌（Escherichia coli）等。異化型酶參與使用亞硝酸氧化有機物質(zhì)的過程，包括單電子反應(yīng)生成NO和6個電子的還原產(chǎn)生氨。其脫氮作用是細(xì)菌或真菌等獲得能量、適應(yīng)環(huán)境生存的生理過程。脫氮細(xì)菌、真菌或植物的亞硝酸還原酶有二種：銅型和鐵型。銅型（CuNiR）含有類似于銅藍蛋白（azurin）的銅中心部位，銅藍蛋白為電子供體；鐵型（ccNiR）含有同源雙體，包括c型和d1型細(xì)胞色素結(jié)構(gòu)域，細(xì)胞色素C為電子供體。亞硝酸鹽在食品工業(yè)中用于色素、調(diào)味和防止氧化，還用于蔬菜發(fā)酵，但是它具有致畸（tetragenic）和致癌作用（carcinogenic），會引起高鐵血紅蛋白血癥（methemoglobinemia）。基于底物亞硝酸鹽（nitrite），通過亞硝酸鹽還原酶（nitrite reductase；NiR）的催化作用，而還原為氨或一氧化氮，進而使用磺胺酸（sulfanilic acid）和N,N-二甲基-1-萘胺（N, N dimethyl-1-naphthylamine），呈現(xiàn)無色反應(yīng)，而對照顯示紅色，來定性分析亞硝酸鹽還原酶的活性。

產(chǎn)品內(nèi)容

培養(yǎng)液（Reagent A） 毫升

反應(yīng)液（Reagent B） 毫升

顯色液（Reagent C） 毫升

產(chǎn)品說明書 1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；顯色液（Reagent C）避免光照；反應(yīng)液（Reagent B）具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證3月

用戶自備

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

恒溫培養(yǎng)箱：用于細(xì)菌培養(yǎng)

實驗步驟

• 準(zhǔn)備好2個15毫升錐形離心管，標(biāo)記為：背景對照和待測樣品
• 分別移取xx毫升培養(yǎng)液（Reagent A）到15毫升錐形離心管
• 接種用戶自備的待測細(xì)菌樣品到待測樣品管
• 放進35℃培養(yǎng)箱孵育48小時（注意：少量菌種可以延長孵育至5天）
• 加入xx微升反應(yīng)液（Reagent B），混勻
• 加入xx微升顯色液（Reagent C），混勻
• 觀察2分鐘
• 結(jié)果：

注意事項

• 本產(chǎn)品為20次操作
• Veillonellae、Haemophili、Staphylococci、Corynebacteria、Lactobacilli、Flavobacteria、Fusobacteria、Enterobacteriaceae、Neisseria spp、Leuconostoc等亞硝酸還原酶陽性
• 操作時，須戴手套
• 操作時，嚴(yán)格無菌，避免污染母液
• 反應(yīng)液（Reagent B）具有腐蝕性，注意操作安全
• 樣品中避免含有各種還原性化學(xué)物質(zhì)，包括巰基乙醇（2-mercaptoethanol）、二硫蘇糖醇（dithiothreitol；DTT）、維生素C（ascorbic acid）和*（azide）等
• 與背景對照測定顯示紅色相比，待測樣品呈現(xiàn)無色，表明具有酶活性
• 本公司提供系列亞硝酸鹽還原酶分析試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感