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上海宸功生物技術(shù)有限公司
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可溶性包涵體蛋白復(fù)性(化學(xué)稀釋I)試劑盒說(shuō)明書(shū)

時(shí)間:2017/9/29閱讀:1555
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可溶性包涵體蛋白復(fù)性(化學(xué)稀釋I)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

主要用途

可溶性包涵體蛋白復(fù)性(化學(xué)稀釋I)試劑是一種旨在使用化學(xué)稀釋方法,使可溶性變性純化蛋白重新折疊,恢復(fù)其蛋白功能和活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種可溶性純化蛋白,尤其是細(xì)菌內(nèi)重組蛋白(融合蛋白)以及可溶性處理的包涵體蛋白??珊罄m(xù)用于蛋白功能、酶活性等分析。產(chǎn)品即到即用,性能穩(wěn)定,參數(shù)優(yōu)化,操作便捷,復(fù)性效果理想。 技術(shù)背景 在蛋白純化和融化過(guò)程中,特別是包涵體蛋白,變性劑(denaturant)提供了zui有效的手段,其獲得的純化蛋白屬于變性蛋白(denatured protein)。為了使變性蛋白恢復(fù)為天然蛋白(native protein),即具有蛋白質(zhì)的自然結(jié)構(gòu)和活性,需要進(jìn)行蛋白復(fù)性(renaturation)或重新折疊(refolding)。蛋白復(fù)性是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程,諸如pH、離子強(qiáng)度、低分子添加劑、氧化還原電位(redox potential)和溫度等物化因子,影響體外蛋白復(fù)性的效率。通常體外復(fù)性的方法包括稀釋法和緩沖交換法。前者通過(guò)化學(xué)處理,而后者采用物理方法(例如透析、膜過(guò)濾(diafiltration)、凝膠過(guò)濾層析(gel-filtration chromatography)等,以達(dá)到蛋白復(fù)性的效果。L-精氨酸(L-arginine)、聚乙二醇(PEG)、硫代甜菜堿(sulfobetaine)、去垢劑、變性劑等將影響化學(xué)稀釋復(fù)性處理的效率。

產(chǎn)品內(nèi)容

稀釋液(Reagent A) 10毫升

還原液(Reagent B) 5毫升

平衡液(Reagent C) 5毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份

保存方式

保存在-20℃冰箱里, 避免光照,有效保證6月

用戶(hù)自備

1.5毫升離心管:用于樣品保存的容器

恒溫?fù)u床:用于反應(yīng)孵育

實(shí)驗(yàn)步驟

方法一:

還原復(fù)性

1.準(zhǔn)備好可溶性純化變性蛋白樣品

2.移取適量的蛋白樣品到1.5毫升離心管

3.加入適量的稀釋液(Reagent A)調(diào)整蛋白濃度到10毫克/毫升

4.移取100微升蛋白樣品到新的1.5毫升離心管

5.加入900微升還原液(Reagent B)

6.放進(jìn)20℃恒溫?fù)u床孵育4小時(shí),速度為200RPM

7.(選擇步驟)移取10微升進(jìn)行生物檢測(cè),例如蛋白功能或活性:比色法、HPLC、受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)等確定復(fù)性蛋白活性值

8.即刻放進(jìn)-70℃冰箱里保存

方法二:

平衡復(fù)性 

1.準(zhǔn)備好可溶性純化變性蛋白樣品

2.移取適量的蛋白樣品到1.5毫升離心管

3.加入適量的稀釋液(Reagent A)調(diào)整蛋白濃度到5毫克/毫升

4.移取5微升蛋白樣品到新的1.5毫升離心管

5.加入195微升平衡液(Reagent C)

6.放進(jìn)28℃恒溫?fù)u床孵育2小時(shí),速度為200RPM

7.(選擇步驟)移取10微升進(jìn)行生物檢測(cè),例如蛋白功能或活性:比色法、HPLC、受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)等確定復(fù)性蛋白活性值

8.即刻放進(jìn)-70℃冰箱里保存

注意事項(xiàng)

1.本產(chǎn)品為5次操作(還原和平衡各5次)

2.操作時(shí)須戴手套

3.本產(chǎn)品的復(fù)性效率達(dá)15至30%

4.建議與本公司系列包涵體蛋白溶解試劑盒配套使用

5.由于樣品的特異性,用戶(hù)可以?xún)?yōu)化溫度、孵育時(shí)間、蛋白濃度,以獲得zui大復(fù)性效率

6.如果復(fù)性效率過(guò)低,建議使用可溶性包涵體蛋白復(fù)性(物理透析)試劑盒-HL30044.5

7.如果獲得滿(mǎn)意的復(fù)性效果,用戶(hù)可以按比例擴(kuò)大復(fù)性容量

8.本公司提供系列包涵體蛋白處理試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定無(wú)蛋白酶污染

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