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可溶性包涵體蛋白復(fù)性(化學稀釋I)試劑盒說明書

時間:2017/9/29閱讀:1537
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可溶性包涵體蛋白復(fù)性(化學稀釋I)試劑盒產(chǎn)品說明書

主要用途

可溶性包涵體蛋白復(fù)性(化學稀釋I)試劑是一種旨在使用化學稀釋方法,使可溶性變性純化蛋白重新折疊,恢復(fù)其蛋白功能和活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種可溶性純化蛋白,尤其是細菌內(nèi)重組蛋白(融合蛋白)以及可溶性處理的包涵體蛋白??珊罄m(xù)用于蛋白功能、酶活性等分析。產(chǎn)品即到即用,性能穩(wěn)定,參數(shù)優(yōu)化,操作便捷,復(fù)性效果理想。 技術(shù)背景 在蛋白純化和融化過程中,特別是包涵體蛋白,變性劑(denaturant)提供了zui有效的手段,其獲得的純化蛋白屬于變性蛋白(denatured protein)。為了使變性蛋白恢復(fù)為天然蛋白(native protein),即具有蛋白質(zhì)的自然結(jié)構(gòu)和活性,需要進行蛋白復(fù)性(renaturation)或重新折疊(refolding)。蛋白復(fù)性是一個復(fù)雜的過程,諸如pH、離子強度、低分子添加劑、氧化還原電位(redox potential)和溫度等物化因子,影響體外蛋白復(fù)性的效率。通常體外復(fù)性的方法包括稀釋法和緩沖交換法。前者通過化學處理,而后者采用物理方法(例如透析、膜過濾(diafiltration)、凝膠過濾層析(gel-filtration chromatography)等,以達到蛋白復(fù)性的效果。L-精氨酸(L-arginine)、聚乙二醇(PEG)、硫代甜菜堿(sulfobetaine)、去垢劑、變性劑等將影響化學稀釋復(fù)性處理的效率。

產(chǎn)品內(nèi)容

稀釋液(Reagent A) 10毫升

還原液(Reagent B) 5毫升

平衡液(Reagent C) 5毫升

產(chǎn)品說明書 1份

保存方式

保存在-20℃冰箱里, 避免光照,有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管:用于樣品保存的容器

恒溫搖床:用于反應(yīng)孵育

實驗步驟

方法一:

還原復(fù)性

1.準備好可溶性純化變性蛋白樣品

2.移取適量的蛋白樣品到1.5毫升離心管

3.加入適量的稀釋液(Reagent A)調(diào)整蛋白濃度到10毫克/毫升

4.移取100微升蛋白樣品到新的1.5毫升離心管

5.加入900微升還原液(Reagent B)

6.放進20℃恒溫搖床孵育4小時,速度為200RPM

7.(選擇步驟)移取10微升進行生物檢測,例如蛋白功能或活性:比色法、HPLC、受體結(jié)合實驗等確定復(fù)性蛋白活性值

8.即刻放進-70℃冰箱里保存

方法二:

平衡復(fù)性 

1.準備好可溶性純化變性蛋白樣品

2.移取適量的蛋白樣品到1.5毫升離心管

3.加入適量的稀釋液(Reagent A)調(diào)整蛋白濃度到5毫克/毫升

4.移取5微升蛋白樣品到新的1.5毫升離心管

5.加入195微升平衡液(Reagent C)

6.放進28℃恒溫搖床孵育2小時,速度為200RPM

7.(選擇步驟)移取10微升進行生物檢測,例如蛋白功能或活性:比色法、HPLC、受體結(jié)合實驗等確定復(fù)性蛋白活性值

8.即刻放進-70℃冰箱里保存

注意事項

1.本產(chǎn)品為5次操作(還原和平衡各5次)

2.操作時須戴手套

3.本產(chǎn)品的復(fù)性效率達15至30%

4.建議與本公司系列包涵體蛋白溶解試劑盒配套使用

5.由于樣品的特異性,用戶可以優(yōu)化溫度、孵育時間、蛋白濃度,以獲得zui大復(fù)性效率

6.如果復(fù)性效率過低,建議使用可溶性包涵體蛋白復(fù)性(物理透析)試劑盒-HL30044.5

7.如果獲得滿意的復(fù)性效果,用戶可以按比例擴大復(fù)性容量

8.本公司提供系列包涵體蛋白處理試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標準

1.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定無蛋白酶污染

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