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主要用途
活體細(xì)胞線粒體膜通道孔(MPTP)紅色熒光(TMRM)檢測試劑是一種旨在通過四甲基羅丹明甲酯染料,選擇性地聚集在線粒體內(nèi)呈現(xiàn)熒光染色,一旦釋放到細(xì)胞漿,其熒光性顯著降低,來分析和觀察線粒體膜通道孔活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種活體細(xì)胞線粒體(動物、人體、昆蟲等)膜通道孔活性(開放狀態(tài))的檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,活體檢測,分辨率高,操作簡捷,性能穩(wěn)定。
技術(shù)背景
線粒體膜通道孔(mitochondrial permeability transition pore;MPTP)是由線粒體內(nèi)外膜成分構(gòu)成的非特異性且鈣離子依賴性通道。在細(xì)胞凋亡或壞死時,線粒體內(nèi)容物通過膜通道孔釋放到胞漿中。線粒體膜電位的去極化(depolarization),導(dǎo)致膜通道孔的開放,顯著改變線粒體的通透性,使之線粒體膨脹(swelling),內(nèi)容物釋放。其中鈣離子過度進(jìn)入、線粒體谷胱苷肽的氧化和活性氧族水平的增加等導(dǎo)致膜通道孔的持續(xù)開放,而造成細(xì)胞色素C的釋放和線粒體膜電位的消失。四甲基羅丹明甲酯(tetramethylrhodamine methyl ester;TMRM),為羅丹明衍生物陽離子染料,作為電勢測定(potentiometric)熒光探針:*,具有親脂性的; 第二,與線粒體內(nèi)膜負(fù)電極結(jié)合而聚集;第三,容易進(jìn)入細(xì)胞及其線粒體。四甲基羅丹明甲酯進(jìn)入細(xì)胞后,被細(xì)胞內(nèi)酯酶切離,產(chǎn)生四甲基羅丹明。四甲基羅丹明進(jìn)入線粒體后,被線粒體俘獲,呈現(xiàn)強(qiáng)烈熒光。一旦線粒體膜通道孔開放,四甲基羅丹明釋放出來而在胞漿重新分布,其熒光性顯著降低。線粒體內(nèi)熒光的變化,表明膜通道孔的開放狀態(tài)。
注意事項
1.本產(chǎn)品為20次(0.5毫升體系/次)操作
2.操作時,須戴手套
3.操作時,避免污染母液
4.染色前,所有試劑溶液,除染色液(Reagent B)外,需37℃預(yù)熱
5.建議細(xì)胞染色完成后,即刻進(jìn)行熒光檢測分析
6.孵育時,必須避免光照
7.本產(chǎn)品友好使用于雙重染色或重疊染色
8.本產(chǎn)品適合各種規(guī)格的培養(yǎng)細(xì)胞:載玻片,載玻片培養(yǎng)皿,35mm培養(yǎng)皿,和各種培養(yǎng)孔板,須相應(yīng)調(diào)整處理液
9.可以使用±10nm波長的濾波器
10.可以使用100微摩爾CaCl2處理的樣品作為膜通道孔開放的陽性對照
11.如果膜通道孔為瞬時開放(transient),則熒光緩慢且自發(fā)降低
12.本公司提供膜通道孔抑制劑:0.2毫摩爾環(huán)胞素A(cyclosporine A)-12226,維護(hù)熒光完整
13.本公司提供系列線粒體分析試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰
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