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細(xì)胞色素P450酶體系濃度定量檢測試劑盒產(chǎn)品操作說明

時間:2019/8/23閱讀:1422
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細(xì)胞色素P450酶體系濃度定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書

 

主要用途

 

細(xì)胞色素P450酶體系濃度定量檢測試劑是一種旨在通過一氧化碳處理產(chǎn)生的結(jié)合色素還原后,產(chǎn)生差異比色峰值的變化,來測定樣品中酶系濃度的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細(xì)胞或組織裂解萃取液樣品(動物、人體、植物等)、純化微粒體樣品以及體液樣品(血清和血漿等)細(xì)胞色素P450酶系的總濃度檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。

 

技術(shù)背景

 

細(xì)胞色素P450酶是肝細(xì)胞微粒體復(fù)合功能單加氧化酶系統(tǒng)的總稱,共有15000多種亞酶,其中動物和人體4778種、植物5769種、真菌3045種、細(xì)菌1200種等。作用在于體內(nèi)外源化合物(xenobiotics),包括藥物、致癌劑、化學(xué)污染物的氧化代謝,即單加氧化作用(monooxygenation)和羥化作用(hydroxylation)。細(xì)胞色素P450酶是微粒體中一氧化碳結(jié)合色素,在450nm波長產(chǎn)生峰值。 

           

產(chǎn)品內(nèi)容

 

緩沖液(Reagent A) 50毫升

還原液(Reagent B) 5管

稀釋液(Reagent C) 5毫升

產(chǎn)品說明書   1份

 

保存方式

 

保存在4℃冰箱里,有效保證6月

 

用戶自備

 

1.5毫升離心管:用于樣品操作的容器

一氧化碳:用于結(jié)合樣品色素

比色皿:用于比色的容器

分光光度儀:用于比色分析

 

實驗步驟

 

實驗開始前,移出1毫升稀釋液(Reagent C)到還原液(Reagent B)管里,混勻后,標(biāo)記為反應(yīng)工作液,置于冰槽里備用。

 

1.準(zhǔn)備好待測樣品(例如細(xì)胞或組織裂解萃取液或微粒體樣品等),置于冰槽里

2.設(shè)定好分光光度儀(溫度為25℃):波長450nm和490nm,并置零 

3.移取2毫克待測樣品到1.5毫升離心管

4.加入適量的緩沖液(Reagent A)到總?cè)萘繛?00微升,混勻

5.插入一氧化碳管于液體中,氣泡20秒(注意:使用微量一氧化碳,避免管內(nèi)液體溢出)

6.加入100微升還原工作液,混勻

7.移入到1毫升比色皿

8.即刻放進(jìn)分光光度儀檢測,獲得吸光讀數(shù)

9.實際吸光讀數(shù):OD450-OD490 

10.計算樣品濃度:

 

[實際吸光讀數(shù)X樣品稀釋倍數(shù)X 1.0(體系容量;毫升]÷[0.9(樣品容量;毫升)X 91(毫摩爾吸光系數(shù))]=微摩爾/毫升÷(樣品重量)毫克/毫升=微摩爾/毫克

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