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人中性粒細(xì)胞防御素1-3(HNP1-3)ELISA試劑盒技術(shù)流程：

雙抗體夾心法(檢測未知抗原)

間接法(檢測未知抗體)

1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。
3、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。
4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)
3、加酶標(biāo)抗體：于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.05ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。
4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

產(chǎn)品介紹：

產(chǎn)品名稱：人中性粒細(xì)胞防御素1-3(HNP1-3)ELISA試劑盒

英文名稱：Human HNP1-3 ELISA Kit

產(chǎn)品編號：YMH12139

人HNP1-3試劑盒產(chǎn)品規(guī)格：

48T(48T檢測雙標(biāo)準(zhǔn)的可以檢測37個樣本，其他有10個標(biāo)準(zhǔn)品孔，1個空白對照。48T檢測單標(biāo)準(zhǔn)可以檢測40個樣本，其他有7個標(biāo)準(zhǔn)品孔，1個空白對照。 )

96T（96T檢測雙標(biāo)準(zhǔn)的可以檢測85個樣本，其他有10個標(biāo)準(zhǔn)品孔，1個空白對照。96T檢測單標(biāo)準(zhǔn)可以檢測90個樣，7個標(biāo)準(zhǔn)品控 1個空白對照。）

實驗設(shè)備及操作步驟

人中性粒細(xì)胞防御素1-3試劑盒檢測方法都可以通過標(biāo)準(zhǔn)酶標(biāo)儀使用。

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：ELISA試劑盒內(nèi)附標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶在小試管中進(jìn)行稀釋。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復(fù)5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育

8. 洗滌

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度。測定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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