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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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番茄內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)LAT52基因PCR試劑盒常見問題與解決方法
2022-7-5 閱讀(116)
番茄內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)LAT52基因PCR試劑盒常見問題與解決方法:
陽性對照、待測樣本均無條帶。
1)、PCR反應(yīng)體系或反應(yīng)條件不合適。
2）、PCR試劑保存不當(dāng)失去活性。
3）、引物設(shè)計(jì)問題。
解決方法：
1）使用梯度PCR摸索PCR反應(yīng)條件。
2）2× PCR Mix應(yīng)保存于-20℃，使用時(shí)避免反復(fù)凍融。若使用頻繁，可在4℃短時(shí)間存放。
3）嘗試重新設(shè)計(jì)引物進(jìn)行檢查。
陽性對照有目的條帶，待測樣本無條帶或條帶弱。
1、不當(dāng)儲(chǔ)存或長期儲(chǔ)存引起試劑活性喪失。
2、加入組織裂解液過量。
3、樣本裂解混合液保存不當(dāng)或保存時(shí)間過久，DNA基因組已經(jīng)降解。
4、模板加入量不適合。
5、PCR循環(huán)數(shù)不足。
解決方法：
1、使用新鮮的試劑。
2、增大反應(yīng)體系，或減少裂解液的用量。
3、裂解混合液液可在4℃保存2-3天，盡量使用新制備的裂解液混合液進(jìn)行PCR。
4、在反應(yīng)體系10-20%范圍內(nèi)優(yōu)化模板加入量。反應(yīng)效性能較差時(shí)，可以降模板濃度調(diào)節(jié)到低于10%的范圍。
5、適當(dāng)增加PCR的循環(huán)數(shù)，推薦在35-40循環(huán)為佳。因?yàn)槟０鍙?fù)雜，一般PCR反應(yīng)要比用純化的 DNA模板多5-10個(gè)循環(huán)為佳。
