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BT-549人乳腺管癌細胞培養(yǎng)?操作說明

2023-8-23  閱讀(77)

BT-549人乳腺管癌細胞培養(yǎng)操作說明:

1)對于常溫運輸?shù)募毎?,收到細胞后,檢查是否有運輸問題,即細胞培養(yǎng)瓶或管是否破損,細胞培養(yǎng)液是否溢出。若沒有運輸問題,請75%酒精消毒后,保留封口膜,放入細胞培養(yǎng)箱中靜置。嚴格檢查培養(yǎng)箱的參數(shù):溫度,濕度和CO2濃度。細胞靜置時間一般為6-12小時后,細胞狀態(tài)穩(wěn)定后,即可開始后續(xù)操作。選用正確的細胞培養(yǎng)體系,A2780(人卵巢癌細胞)嚴格按照說明書的培養(yǎng)條件進行培養(yǎng)。條件允許,培養(yǎng)的前三天內(nèi)做細胞拍照記錄,通過郵件發(fā)送給我們做及時狀態(tài)跟蹤。

2)對于干冰運輸?shù)募毎?,請取出冷凍管后,須立即放?7C水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化,并注意水面不可超過冷凍管蓋沿,否則易發(fā)生污染情形。然后將其復(fù)蘇培養(yǎng),次日更換培養(yǎng)液。

1)細胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察,如細胞大部分又貼回瓶底,表明細胞活力正常,剩余漂浮的細胞可以離心去掉,留10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察,細胞生長至匯合度80%,進行消化傳代;如細胞還是不貼壁,將細胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶,原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),中間注意觀察,我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo),直到問題解決。

2)對于生長緩慢的貼壁細胞:可采用適當?shù)奶岣吲囵B(yǎng)基中血清濃度,或隔日換液的方法來保證細胞的狀態(tài)和生長速度。

3)對于生長不均的貼壁細胞:在培養(yǎng)過程中若出現(xiàn)細胞分布明顯不均時(即某一區(qū)域細胞已重疊生長,而旁邊則為一塊空白),此時可將細胞進行消化,重新打散,貼壁,加入新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。 

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