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上海莼試生物技術(shù)有限公司

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肺炎鏈球菌多糖抗原(SPNPS Ag)試劑盒技術(shù)參數(shù)

2017-7-6  閱讀(286)

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【詳細說明】

肺炎鏈球菌多糖抗原(SPNPS Ag)試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中肺炎鏈球菌多糖抗原(SPNPS Ag)水平。用純化的肺炎鏈球菌多糖抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入肺炎鏈球菌多糖抗原(SPNPS Ag),再與HRP標記的肺炎鏈球菌多糖抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的肺炎鏈球菌多糖抗原(SPNPS Ag)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中肺炎鏈球菌多糖抗原(SPNPS Ag)濃度。
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標本要求 
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1、標準品的稀釋:肺炎鏈球菌多糖抗原(SPNPS Ag)試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
200ng/L
5號標準品
150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
100ng/L
4號標準品
150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
50ng/L
3號標準品
150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
25ng/L
2號標準品
150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
12.5ng/L
1號標準品
150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2、加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4、配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6、加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7、溫育:操作同3。
8、洗滌:操作同5。
9、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11、肺炎鏈球菌多糖抗原(SPNPS Ag)試劑盒測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。



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