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上海莼試生物技術(shù)有限公司

主營產(chǎn)品: ELISA試劑盒,ELISA試劑盒價格,ELISA試劑盒報價

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小鼠組蛋白H2b(histon-H2b)elisa試劑盒使用說明

2022-4-29  閱讀(89)

提 供 商 上海莼試生物技術(shù)有限公司 資料大小 13.9KB
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【詳細(xì)說明】ELISA法是免疫診斷中的一項新技術(shù),現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,認(rèn)為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查,而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此,也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來測定抗體,而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原,所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴大,可概括四個方面:

1、免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位。

2、研究抗酶抗體的合成。

3、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。

4、定量檢測體液中抗原或抗體成份。

組成 :

試劑盒組成      48孔配置            96孔配置            保存

說明書             1份                1份  

封板膜          2片(48)          2片(96)   

密封袋             1個                1個  

酶標(biāo)包被板        1×48             1×96            2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品          0.3ml×6瓶         0.3ml×6瓶         2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液    3ml×1瓶           6ml×1瓶           2-8℃保存

檢測抗體-HRP    5ml×1瓶           10ml×1瓶          2-8℃保存

顯色劑A液      3ml×1瓶           6ml×1瓶           2-8℃保存

顯色劑B液      3ml×1瓶           6ml×1瓶           2-8℃保存

終止液          3ml×1瓶          6ml×1瓶         2-8℃保存

20*洗滌緩沖液   25ml×1瓶          15ml×1瓶          2-8℃保存

 

 

需自備的設(shè)備及試劑:

1.450±10nm濾光片酶標(biāo)儀(建議儀器使用前預(yù)熱)

2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL.

3.Eppendorf 移液器.

4.蒸餾水或去離子水.

5.脫脂棉吸水紙.

6.37℃恒溫箱.

7.100ml和1000ml量筒.

8. 準(zhǔn)備若干個標(biāo)準(zhǔn)品稀釋管.

注意事項

1.試劑準(zhǔn)備:所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存。實驗操作中必須使用一次性吸頭,避免交叉污染。

2.加樣:加樣時,要控制加樣速度,避免*孔與zui后一孔之見的時間間隔過大,否則將會導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時間,從而影響實驗的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性;一般加樣時間控制在10分鐘內(nèi),如果樣本數(shù)量過多,可使用多道移液器。

3.孵育:樣品要在密閉的容器內(nèi)進(jìn)行孵育,嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時間和溫度進(jìn)行。

4.洗滌:洗滌過程中反應(yīng)孔中的殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,同時要消除板底殘留的液體和手指痕跡,避免影響zui后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。

5.反應(yīng)時間的控制:加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,10分鐘左右),如果顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。

6.建議實驗前預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高,應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋,計算結(jié)果時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

7.建議使用本試劑盒時先做預(yù)實驗(即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線,試用幾個標(biāo)本),如果對本試劑盒有任何疑問,可和所購經(jīng)銷商,如果因運輸過程導(dǎo)致試劑盒失效,可要求調(diào)換,但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。

 

 

操作步驟

1. 取出試劑盒,于室溫(20-25℃)放置15-30分鐘。實驗過程應(yīng)在室溫(20-25℃)內(nèi)進(jìn)行。

2. 取出酶標(biāo)板,按照標(biāo)準(zhǔn)品的次序分別加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中。

3. 空白微孔中加入50μl的樣品,空白對照加入50μl的蒸餾水;

4. 在樣品孔中加入10μl的生物su;(不含空白對照孔,切忌:生物su只加樣品孔!)

5. 在各孔中加入100μl的酶標(biāo)記溶液;(不含空白對照孔)

6. 將酶標(biāo)板用封口膠密封后,37℃孵育反應(yīng) 1小時;(在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度)

7. 充分清洗酶標(biāo)板3-5次,保持各孔有充足的水壓;(濃縮洗滌液以1:100的比例與蒸餾水稀釋)

8. 酶標(biāo)板洗滌后用吸水紙*拍干;

9. 各孔加入顯色劑A、B液各50μl;(不含空白對照孔)

10. 20-25℃下避光反應(yīng)15分鐘;

11.各孔加入50μl終止液,終止反應(yīng);

結(jié)果判斷

1. 30分鐘內(nèi)在波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值;

2. 以O(shè)D值為縱坐標(biāo),以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo),繪制曲線圖;

3. 根據(jù)樣品的OD值查找對應(yīng)的濃度范圍;



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