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實(shí)時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌（PCR-熒光探針法）
產(chǎn)品貨號：CP100318
產(chǎn)品規(guī)格：48T  0.1PCR管/48T   0.2PCR管
產(chǎn)品分類：小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌PCR-熒光探針法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
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二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個離心管，分別為6，5，4，3，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
腸沙門氏菌腸亞種波那雷恩血清型G蛋白偶聯(lián)受體GPR37樣蛋白1抗體Human XRCC2 ELISA Kit雞α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDHC)免疫試劑盒

大腸埃希氏桿菌G蛋白偶聯(lián)受體GPR105蛋白抗體Human YOD1 ELISA Kit雞α葡萄糖苷酶(α-glucosidase)免疫試劑盒

熒光假單胞菌G蛋白偶聯(lián)受體GPR12蛋白抗體Human PDE1C(Calcium/calmodulin-dependent 3′,5′-cyclic nucleotide phosphodiesterase 1C) ELISA Kit雞α干擾素(IFN-α)免疫試劑盒

稻平臍蠕孢G蛋白偶聯(lián)受體GPR110蛋白抗體Human XRCC5/Ku80(X-ray repair cross-complementing protein 5) ELISA Kit雞α1酸性糖蛋白(OGCHI)免疫試劑盒

北京擲孢酵母G蛋白偶聯(lián)受體GPR125蛋白抗體Human XRCC4 ELISA Kit雞α/β水解酶域包含蛋白5(ABHD5)免疫試劑盒

杏鮑菇G蛋白偶聯(lián)受體RTA蛋白抗體Human WIPI1 ELISA Kit雞Toll樣受體4(TLR4)免疫試劑盒

根瘤菌G蛋白偶聯(lián)受體GPR155蛋白抗體Human XAB2 ELISA Kit雞N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)免疫試劑盒

柔嫩艾美耳球蟲G蛋白偶聯(lián)受體GPR30蛋白抗體Human MTX2(Metaxin-2) ELISA Kit雞L苯氨酸解氨酶(PAL)免疫試劑盒

Chitinophaga sp.G蛋白偶聯(lián)受體GPR86蛋白抗體Human WIPI2 ELISA Kit雞HSP90抗體(IgM)免疫試劑盒

停滯棒桿菌G蛋白偶聯(lián)受體HM74蛋白抗體Human WIT1 ELISA Kit雞HSP90抗體(IgG)免疫試劑盒

小單孢菌樣蛋白1樣蛋白抗體Human WNK4 ELISA Kit雞HSP72抗體(IgM)免疫試劑盒

細(xì)鏈格孢菌磷酸化接頭蛋白Gab 2抗體Human WNT3(Proto-oncogene Wnt-3) ELISA Kit雞HSP72抗體(IgG)免疫試劑盒

釀酒酵母磷酸化接頭蛋白Gab2抗體Human WRAP53 ELISA Kit雞HSP60抗體(IgM)免疫試劑盒

婁徹鏈霉菌干擾素/維甲酸誘導(dǎo)凋亡相關(guān)基因抗體Human WDR81 ELISA Kit雞HSP60抗體(IgG)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌磷酸化接頭蛋白Gab 2抗體Human WRN ELISA Kit雞HSP27抗體(IgG)ELISA ki

甘薯長喙殼多肽N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶13抗體Human WRNIP1 ELISA Kit雞HSP27 IgM 抗體免疫試劑盒
小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌（PCR-熒光探針法）: 炭黑曲霉 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.2%槲皮素-7-O-葡萄糖苷

鏈霉菌屬菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=6%脫水內(nèi)酯