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原代細(xì)胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點(diǎn)燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動一次，如用電磁恒溫?cái)嚢杵飨?。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計(jì)數(shù)：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過大，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細(xì)胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。

大鼠視網(wǎng)膜前體細(xì)胞

商品屬性：

細(xì)胞簡介：

大鼠視網(wǎng)膜前體分離自視網(wǎng)膜組織；視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層，是一層透明的薄膜。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺層組成，兩層間在病理情況下可分開，稱為視網(wǎng)膜脫離。色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連，由色素上皮細(xì)胞組成，它們具有支持和營養(yǎng)光感受器細(xì)胞、遮光、散熱以及再生和修復(fù)等作用。組織學(xué)上視網(wǎng)膜分為10層，由外向內(nèi)分別為：色素上皮層、視錐、視桿細(xì)胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內(nèi)顆粒層、內(nèi)叢狀層、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、神經(jīng)纖維層、內(nèi)界膜。視網(wǎng)膜內(nèi)層為襯于血管膜內(nèi)面的一層薄膜，有感光作用；后部鼻側(cè)有一視神經(jīng)乳頭。視網(wǎng)膜上的感覺層是由三個神經(jīng)元組成。第一神經(jīng)元是視細(xì)胞層，專司感光，它包括錐細(xì)胞和桿細(xì)胞。視桿細(xì)胞主要在離中心凹較遠(yuǎn)的視網(wǎng)膜上，而視錐細(xì)胞則在中心凹處最多。第二層叫雙節(jié)細(xì)胞，約有10到數(shù)百個視細(xì)胞通過雙節(jié)細(xì)胞與一個神經(jīng)節(jié)細(xì)胞相聯(lián)系，負(fù)責(zé)聯(lián)絡(luò)作用。第三層叫節(jié)細(xì)胞層，專管傳導(dǎo)。視網(wǎng)膜是一層菲薄的但又非常復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，它貼于眼球的后壁部，傳遞來自視網(wǎng)膜感受器沖動的神經(jīng)纖維跨越視網(wǎng)膜表面，經(jīng)由視神經(jīng)到達(dá)出口。視網(wǎng)膜的分辨力是不均勻的，在黃斑區(qū)，其分辨能力。

方法簡介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠視網(wǎng)膜前體經(jīng)Nestin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠視網(wǎng)膜前體采用消化法結(jié)合專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含B-27 Supplement、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 半貼半懸浮

細(xì)胞形態(tài) 圓形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細(xì)胞VS細(xì)胞系：

用酶或機(jī)械方法直接從人或動物組織中分離出來的細(xì)胞。嚴(yán)格來說，從機(jī)體分離出來到傳代之前的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞，絕大部分的原代細(xì)胞在體外可以分裂10-15次(這與細(xì)胞的端粒長短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞。

原代細(xì)胞一般傳至10代左右，大部分細(xì)胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過“危機(jī)"而繼續(xù)傳下去，存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代，叫細(xì)胞株。當(dāng)50代以后又會出現(xiàn)“危機(jī)"，這時有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c(diǎn)，從而可能無限制地傳代下去，稱為細(xì)胞系。

也有認(rèn)為細(xì)胞系指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。由此便引申出了后來的有限細(xì)胞系、無限細(xì)胞系，因此，細(xì)胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細(xì)胞，廣義是指可傳代的細(xì)胞。而細(xì)胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的單一細(xì)胞稱為細(xì)胞株。

細(xì)胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價格便宜、無限傳代等優(yōu)點(diǎn)，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯誤鑒定及交叉污染的問題。

公司正在銷售的產(chǎn)品：

豬偽狂犬病毒(PRV/PFV)ELISA試劑盒 96T/48T

Human maix metalloproteinase 9/ gelatinase B (MMP-9/Gelatinase B) ELISA Kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/Gelatinase B)ELISA試劑盒

GuineaPigadvancedglycationendproducts,AGEsELISAKit 豚鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforANNA-1/Hu(Humanneuronalnuclearaoaibody)ELISAKit人抗神經(jīng)元核抗體1型/抗Hu抗體規(guī)格：48T/96T

血液超氧化物陰離子比色法定量檢測試劑盒20次

PorcineGlucoseanspoer2,GL2ELISAKit豬葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(GL2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

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病毒抗體elisa試劑盒   病毒抗體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   病毒抗體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：病毒抗體試劑盒、病毒抗體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

豬偽狂犬病抗體elisa試劑盒   豬偽狂犬病抗體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬偽狂犬病抗體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬偽狂犬病抗體試劑盒、豬偽狂犬病抗體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

豬褪黑素elisa試劑盒   豬褪黑素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬褪黑素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬褪黑素試劑盒、豬褪黑素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

大鼠白介素18(IL-18)ELISA試劑盒 ，英文名： IL-18 ELISA Kit

Rabbit maix metalloproteinase 9 (MMP-9) ELISA Kit 兔子基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)ELISA試劑盒

ELISA 小鼠白介素-27(mouse IL-27) 48T/96T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforIL-2sRBeta(HumanIerleukin2)ELISAkit人白介素2可溶性受體β鏈規(guī)格：48T/96T

通用型基因甲基化程度定量分析試劑盒20次

ELISAKitOLAb大鼠氧化低密度脂蛋白抗體規(guī)格：48T/96T

PDGFRB重組大鼠 PDGFRB / PDGFR-1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

DVL1 (dishevelled 1 0.5mgDVL1 (dishevelled 1) 蓬亂蛋白1

SOCS3重組人 SOCS3 / CIS3 蛋白 (His & Trx 標(biāo)簽) Protein

BCL2 Protein Human 重組人 BCL2 / Bcl-2 蛋白 (His 標(biāo)簽)

FABP4 Protein Mouse 重組小鼠 FABP4 / ALBP / A-FABP 蛋白 (His 標(biāo)簽)

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FABP4 Protein Mouse 重組小鼠 FABP4 / ALBP / A-FABP 蛋白 (His 標(biāo)簽)

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