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PCR反應(yīng)技術(shù)特點(diǎn)

2022-11-23  閱讀(312)


聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)是一項(xiàng)利用 DNA 雙鏈復(fù)制原理,在生物體外復(fù)制特定 DNA 片段的的核酸合成技術(shù)??稍诙虝r(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增目的 DNA 片段,而不必依賴大腸桿菌或酵母菌等生物體。


1、靈敏度高 

PCR 產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg = 10-12)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(μg=-6)水平。能從 100 萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR 的靈敏度可達(dá) 3 個(gè) RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中最小檢出率為 3 個(gè)細(xì)菌。

 

2、特異性強(qiáng) 

PCR 反應(yīng)的特異性決定因素:

引物與模板 DNA 特異正確的結(jié)合;

堿基配對(duì)原則;

Taq 聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;

靶基因的特異性與保守性。


3、簡(jiǎn)便、快速

只需要一次性將反應(yīng)液加好后,就可以進(jìn)行擴(kuò)增。一般 2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。

 

4、純度要求低

不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及 RNA 均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗漱液、毛發(fā)、細(xì)胞、活組織等 DNA 擴(kuò)增檢測(cè)。

 

 




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