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上海邦景實業(yè)有限公司
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大鼠α氨基丁酸受體（α-ABAR）試劑盒使用說明書
2019-6-25 閱讀(142)
| 提 供 商 | 上海邦景實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 20.8KB |
|---|---|---|---|
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| 資料類型 | JPG 圖片 | 瀏覽次數(shù) | 142次 |
大鼠α氨基丁酸受體（α-ABAR）試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍：6.0 pg/ml - 160pg/ml
使用目的：
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中α氨基丁酸受體（α-ABAR）含
量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠α氨基丁酸受體（α-ABAR）水平。用純
化的大鼠α氨基丁酸受體（α-ABAR）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微
孔中依次加入α氨基丁酸受體（α-ABAR），再與 HRP 標記的α氨基丁酸受體（α-ABAR）
抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在
HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的
α氨基丁酸受體（α-ABAR）呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），
通過標準曲線計算樣品中大鼠α氨基丁酸受體（α-ABAR）濃度。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液
20ml×1 瓶
7 終止液
6ml×1 瓶
2 酶標試劑
6ml×1 瓶
8 標準品（320pg/ml） 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板
4 樣品稀釋液
5 顯色劑 A 液
6 顯色劑 B 液
標本要求
12 孔×8 條
6ml×1 瓶
6ml×1 瓶
6ml×1/瓶
9 標準品稀釋液
10 說明書
11 封板膜
12 密封袋
1.5ml×1 瓶
1 份
2 張
1 個
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復凍融
2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
160pg/ml
80pg/ml
40pg/ml
20pg/ml
10pg/ml
5 號標準品
4 號標準品
3 號標準品
2 號標準品
1 號標準品150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液
150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，
然后再加待測樣品 10µl（樣品終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總結(jié)：計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的
OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實際濃度。
