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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 進(jìn)口elisa試劑盒，細(xì)胞株，細(xì)胞系，菌種 |
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- www.bhsy-e.com/
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- 品牌 其他品牌
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
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更新時(shí)間：2023-01-21 10:00:52瀏覽次數(shù)：178
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商品屬性：
產(chǎn)品名稱：SV40T和EBNA1基因修飾細(xì)胞：293ET
貨號(hào)：BJ-X96630
規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
分類：細(xì)胞系
商品介紹：
名稱 293ET (人胚腎細(xì)胞(SV40T和EBNA1基因修飾細(xì)胞)) 年齡（性別） 胚胎 生長(zhǎng)特性 懸浮細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài) 圓形 背景描述 293FT細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)SV40大T抗原，并且促進(jìn)適病毒產(chǎn)物的產(chǎn)生。 生長(zhǎng)培養(yǎng)基 DMEM＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例 1×10^5-1×10^6個(gè)/mL 推薦換液頻率 2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 保藏機(jī)構(gòu) ATCC; PTA-5077 |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：產(chǎn)品僅用于科研
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
AGL1 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞10×100μL Wortmannin(PI3K 抑制劑 )0.5mg
EHA105 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞10×100μL WGA 糖蛋白分離試劑盒10 次
GV3101 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞10×100μL Vinblastine( 長(zhǎng)春新堿 )100μL
LBA4404 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞10×100μL UTP 溶液，2.5mM2mL
AH109 酵母感受態(tài)細(xì)胞10×100μL UTP 溶液，100mM0.25mL
大鼠花生四烯酸5脂氧合酶(Alox5)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠花生四烯酸12-脂氧合酶,白細(xì)胞型(Alox12l/Alox12/Alox15)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)
大鼠花生四烯酸(AA)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠紅細(xì)胞生成素受體(EPOR)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)elisa檢測(cè)試劑盒
SV40T和EBNA1基因修飾細(xì)胞：293ET醋酸鈉緩沖液NaAc buffer，3M，pH 5.3 500ml
大丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）elisa檢測(cè)試劑盒
大腸桿菌蛋白提取試劑盒100T
大腸桿菌蛋白提取試劑盒50T
大腸桿菌膜蛋白提取試劑盒100T
操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
