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可逆型Taq DNA聚合酶抑制劑

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更新時間：2018-06-13 14:10:40瀏覽次數(shù)：464次

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產(chǎn)品簡介

可逆型Taq DNA聚合酶抑制劑Taq DNA聚合酶是進(jìn)行PCR的較常用工具酶，但是由于它在常溫下還是具有部分活性，所以在有大量非特異DNA存在的反應(yīng)體系中擴(kuò)增低拷貝目的片段時，經(jīng)常會出現(xiàn)非特異的擴(kuò)增產(chǎn)物。目前較常見的解決方法是使用抗Taq DNA聚合酶的抗體和熱啟動的Taq DNA聚合酶（如AmpliTaq Gold），但其缺點(diǎn)PCR反應(yīng)中加熱步驟會使抗體的抑制活性和修飾基團(tuán)不可逆喪失。本產(chǎn)品的

詳細(xì)介紹

可逆型Taq DNA聚合酶抑制劑

名稱	規(guī)格	價(jià)格	手冊
可逆型Taq DNA聚合酶抑制劑	0.3mL	190元

Taq DNA聚合酶是進(jìn)行PCR的常用工具酶，但是由于它在常溫下還是具有部分活性，所以在有大量非特異DNA存在的反應(yīng)體系中擴(kuò)增低拷貝目的片段時，經(jīng)常會出現(xiàn)非特異的擴(kuò)增產(chǎn)物。目前常見的解決方法是使用抗Taq DNA聚合酶的抗體和熱啟動的Taq DNA聚合酶(如AmpliTaq Gold)，但其缺點(diǎn)PCR反應(yīng)中加熱步驟會使抗體的抑制活性和修飾基團(tuán)不可逆喪失。本產(chǎn)品的特點(diǎn)是：

1. 自身穩(wěn)定，產(chǎn)品本身為非蛋白質(zhì)試劑，十分穩(wěn)定，便于保存和運(yùn)輸。

2. 抑制可逆，在溫度降低到常溫后，其抑制活性又得以恢復(fù)。

3. 即開即用，在加酶前加入1/10體積的本產(chǎn)品到PCR反應(yīng)液體中即可，不需要預(yù)熱激活（如AmpliTaq Gold需要95℃激活）。

4. 除Taq pol外，還可用于抑制其他DNA聚合酶的活性，如：Tth pol、Stoffel 片段、Tfl pol 、Tbr pol等。而一種酶的抗體一般對另一種酶的活性沒有抑制作用。

5. 與后續(xù)的RT-PCR兼容。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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