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上海聯(lián)邁生物工程有限公司
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更新時間：2018-06-15 11:56:12瀏覽次數(shù)：1142次
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KM 71酵母菌KM71是畢赤酵母菌株，屬于真核細(xì)胞。具有氨芐和卡納抗性。質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的條件為電轉(zhuǎn)化，應(yīng)用于蛋白表達(dá)。適宜生長溫度是28至30度，一般可以設(shè)置在30度培養(yǎng)，溫度超過32度對蛋白的表達(dá)是有害的，并可能導(dǎo)致細(xì)胞的死亡。本菌株是組氨酸缺陷型（His4基因型），如果表達(dá)載體上攜帶有組氨酸基因，可補償宿主菌的組氨酸缺陷，因此可以在不含組氨酸的培養(yǎng)基上篩選轉(zhuǎn)化子。這些受體菌自發(fā)突變?yōu)榻M氨酸野生型的
KM 71酵母菌
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
KM 71酵母菌 | 1 管 | 詢價 |
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KM71是畢赤酵母菌株，屬于真核細(xì)胞。具有氨芐和卡納抗性。質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的條件為電轉(zhuǎn)化，應(yīng)用于蛋白表達(dá)。適宜生長溫度是28至30度，一般可以設(shè)置在30度培養(yǎng)，溫度超過32度對蛋白的表達(dá)是有害的，并可能導(dǎo)致細(xì)胞的死亡。本菌株是組氨酸缺陷型（His4基因型），如果表達(dá)載體上攜帶有組氨酸基因，可補償宿主菌的組氨酸缺陷，因此可以在不含組氨酸的培養(yǎng)基上篩選轉(zhuǎn)化子。這些受體菌自發(fā)突變?yōu)榻M氨酸野生型的概率一般低于10-8。KM71畢赤酵母可以在YPD培養(yǎng)基中生長，或者在補充有組氨酸的minimal media中生長，但是無法在單獨的minimal media培養(yǎng)基中生長。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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