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更新時(shí)間：2018-06-15 15:56:06瀏覽次數(shù)：164次
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微量蛋白沉淀試劑盒本產(chǎn)品用于沉淀濃縮微量蛋白質(zhì)樣品，并在此過程中去除掉蛋白質(zhì)樣品中的干擾下一步實(shí)驗(yàn)的物質(zhì)，其原理是通過酸性有機(jī)溶劑使蛋白質(zhì)變性，溶解度降低，在離心條件下沉淀，而達(dá)到沉淀濃縮的目的。它具有下列特點(diǎn)：
1. 方便，即開即用，不需要單獨(dú)準(zhǔn)備試劑，優(yōu)化條件。
微量蛋白沉淀試劑盒
名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
微量蛋白沉淀試劑盒 | 50次 | 590元 |
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本產(chǎn)品用于沉淀濃縮微量蛋白質(zhì)樣品，并在此過程中去除掉蛋白質(zhì)樣品中的干擾下一步實(shí)驗(yàn)的物質(zhì)，其原理是通過酸性有機(jī)溶劑使蛋白質(zhì)變性，溶解度降低，在離心條件下沉淀，而達(dá)到沉淀濃縮的目的。它具有下列特點(diǎn)：
1. 方便，即開即用，不需要單獨(dú)準(zhǔn)備試劑，優(yōu)化條件。
2. 快速，整個(gè)過程可以在一小時(shí)內(nèi)完成。
3. 靈敏度高，能濃縮蛋白質(zhì)總量只有1 μg的蛋白質(zhì)（在200 μL體系中），得到的蛋白沉淀可以溶解在任何體積的自備后續(xù)緩沖液中。
4. 去污染效果好，能有效去除污染的鹽離子、還原劑、去污劑、Ampholine等小分子，可用于許多實(shí)驗(yàn)的預(yù)處理，便于下一步操作。
5. 與多種后續(xù)試驗(yàn)兼容，本方法與SDS-PAGE、2D電泳、等電點(diǎn)電泳（IEF）、各種方法的蛋白定量、胰蛋白酶酶切等后續(xù)實(shí)驗(yàn)兼容，得到的蛋白質(zhì)可以直接用于上述實(shí)驗(yàn)。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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