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更新時(shí)間：2018-06-25 17:13:45瀏覽次數(shù)：712次
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ATCC細(xì)胞：70%密度的25cm2培養(yǎng)瓶的細(xì)胞一瓶特點(diǎn)：細(xì)胞代數(shù)為4-5代左右包裝：內(nèi)層無(wú)菌自封袋；防壓泡沫盒；外層防壓保溫氣泡袋；說(shuō)明書細(xì)胞來(lái)源：ATCC。細(xì)胞特性：1、細(xì)胞活力原代取材活力≥90產(chǎn)品復(fù)蘇率≥60培養(yǎng)兩天就能清晰看到軸突與樹(shù)突，培養(yǎng)時(shí)間可長(zhǎng)達(dá)13-16天。
ATCC細(xì)胞
| 名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
| ATCC細(xì)胞 | 200次 | 詢價(jià) |
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70%密度的25cm2培養(yǎng)瓶的細(xì)胞一瓶特點(diǎn)：細(xì)胞代數(shù)為4-5代左右包裝：內(nèi)層無(wú)菌自封袋；防壓泡沫盒；外層防壓保溫氣泡袋；說(shuō)明書細(xì)胞來(lái)源：ATCC。細(xì)胞特性：1、細(xì)胞活力原代取材活力≥90產(chǎn)品復(fù)蘇率≥60培養(yǎng)兩天就能清晰看到軸突與樹(shù)突，培養(yǎng)時(shí)間可長(zhǎng)達(dá)13-16天。
本試劑盒采用生物發(fā)光（bioluminescent）法，利用Firefly luciferase（螢火蟲(chóng)熒光素酶）催化底物L(fēng)uciferin（熒光素）的轉(zhuǎn)化，高效利用ATP的能量，發(fā)射出光子。發(fā)光信號(hào)與存在的ATP量呈正比，而ATP與存在于培養(yǎng)基中的細(xì)胞數(shù)目直接呈正比。ATP的檢測(cè)靈敏度達(dá)到10-13 ，故具有*的敏感性。本試劑盒首先利用熒光素酶反應(yīng)體系，測(cè)定樣品中ATP的發(fā)光值，然后用ATP轉(zhuǎn)換酶將ADP轉(zhuǎn)化成ATP，再次利用同樣的發(fā)光體系，測(cè)定樣品中ADP轉(zhuǎn)化所得的發(fā)光值。獲得的結(jié)果可提供樣品中ADP和ATP的相對(duì)含量及其變化，從而了解酶促反應(yīng)的進(jìn)程或細(xì)胞狀態(tài)的改變。該產(chǎn)品特點(diǎn)如下：
1. 高度敏感：靈敏度達(dá)到10-13
2. 快速簡(jiǎn)便：適合高通量篩選
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，ADP/ATP發(fā)光法細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
取材后應(yīng)立即處理，盡快培養(yǎng)，因故不能馬上培養(yǎng)時(shí)，可將組織塊切成黃豆般大的小塊，置4℃的培養(yǎng)液中保存。取組織時(shí)應(yīng)嚴(yán)格保持無(wú)菌，同時(shí)也要避免接觸其他的有害物質(zhì)。取病理組織和皮膚及消化道上皮細(xì)胞時(shí)容易帶菌，為減少污染可用抗菌素處理。
正在培養(yǎng)中的應(yīng)每隔一定時(shí)間觀察一次，觀察的內(nèi)容包括細(xì)胞是否生長(zhǎng)良好，形態(tài)是否正常，有無(wú)污染，培養(yǎng)基的PH是否太酸或太堿（由酚紅指示劑指示），此外對(duì)培養(yǎng)溫度和CO2濃度也要定時(shí)檢查。
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