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ELISA實(shí)驗(yàn)血清樣本為什么都需要稀釋?
2019-5-22 閱讀(14497)
ELISA實(shí)驗(yàn)血清樣本為什么都需要稀釋?
每一盒ELISA試劑盒里面都有一份對應(yīng)的說明書，而每一份說明書里都會有寫樣本和稀釋液的稀釋比例，為什么樣本都需要稀釋呢?今天的文章中，小編將為您分析：為何ELISA實(shí)驗(yàn)血清樣本都需要稀釋?
在ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)血清為什么要稀釋？有兩個原因：
1）競爭抑制比較明顯，應(yīng)稀釋競爭物；
2）以降低非特異性反應(yīng)，使特異性的抗原抗體反應(yīng)充分體現(xiàn)出來。
血清稀釋用普通的PBS即可，可加1％的BSA，能有效降低ELISA本底，當(dāng)然如果你嫌麻煩我覺得用生理鹽水替代PBS關(guān)系也不大。不管你是用直接競爭還是間接競爭，血清的稀釋倍數(shù)肯定要事先確定，但也不用一點(diǎn)點(diǎn)，你做一個預(yù)試驗(yàn)即可，選擇OD在1.0左右的稀釋倍數(shù)，即你的競爭ELISA中陰性孔OD在1.0，這樣作出來的曲線比較敏感。
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)稀釋血清的步驟：
先把蛋白稀釋一定的倍數(shù)，比如說10倍、20倍稀釋（這樣可以大體確定一個參數(shù)），將抗原進(jìn)行一系列稀釋包被微量反應(yīng)板，再用一定稀釋度的陽性參考血清和陰性參考血清進(jìn)行孵育后洗滌，再加酶結(jié)合物進(jìn)行反應(yīng)，經(jīng)孵育洗滌后，加底物溶液顯色，終止反應(yīng)后分別測定O.D值，選擇O.D值≥1.0的那個抗原稀釋度為zui適包被濃度。一般總是要選擇那個O.D值稍大于1.0，而不選擇小于1.0的抗原濃度。陰性參考血清O.D值要求<0.1-0.2。也就是要求陽性參考血清和陰性參考血清的O.D值有明顯差別。
